海南岛和西沙群岛周边海域石珊瑚细菌性疾病的研究

摘要: 本项目在海南岛周边和西沙群岛海域开展了珊瑚疾病调查，发现该海域属于珊瑚疾病的频发区，在普哥滨珊瑚（Porites pukoensis）和扁枝滨珊瑚(P. andrewsi)等共14种珊瑚中发现了白化病、白斑病、黄色炎症样病症等9种不同类型疾病，其中，普哥滨珊瑚的黄色炎症样病症和扁枝滨珊瑚的白化病最为常见。前者主要出现在永兴岛附近海区，患病部位存在大量黄色脓样分泌物，患病部位水螅体生长正常、萎缩或缺失，有时骨骼部分缺失。后者出现在七连屿一带的扁枝滨珊瑚分布区，白化部位水螅体缺失。.通过将患病珊瑚绑在自然海区的健康珊瑚以直接接触进行人工感染，结果显示：扁枝滨珊瑚白色综合症具有较强传染性，实验组在第5天的感染率为0，两周内的感染率增至85%，白化的速率为0.90-10.76cm2 d-1，平均5.40 ± 3.34 cm2 d-1；对照组感染率为0。为了确定该病病原，以TCBS培养基进行病原分离和培养，并使用两种方法进行人工感染试验，其中，筛选混合菌株时使用两步浸染法，确定有毒菌株时用一步浸染法。结果表明，从自然患病珊瑚中分离的2株细菌XSBZ03和XSBZ14为有毒菌株；对感染患病的珊瑚进行病原重分离，80%以上菌落与攻毒菌的菌落形态特征一致，根据科赫法则，确定XSBZ03与XSBZ14为扁枝滨珊瑚白色综合症病原。经16S rRNA测序、生理生化实验鉴定和MALDI-TOF-MS高通量微生物系统鉴定，该2株菌均为溶藻弧菌 Vibrio alginolytics。利用引物对BASP58f和BASP58r，建立了该病原的快速检测方法。本研究建立的基于“鸟枪打靶”的珊瑚病原两步人工感染法，缩小了病原菌株的搜索范围，可快速、精确地找到珊瑚疾病的病原菌，为确定珊瑚细菌性疾病病原奠定了良好基础。.对扁枝滨珊瑚细菌宏基因组DNA采用PCR-DGGE技术及序列分析结果表明，在64条序列中有34条为可培养细菌，30条为不可培养细菌，其中扁枝滨珊瑚白化部位的特异菌株为哈维氏弧菌和Vibrio communis。该技术未直接检测出扁枝滨珊瑚白化病病原溶藻弧菌，可能是因DGGE技术测定的序列片段过短，从而将溶藻弧菌归为其它近亲种所致。因此，今后珊瑚病原的最终确定还应通过科赫法则，DGGE只能作为一种辅助技术。