缩泉益肾方通过外泌体miRNA2861调节INS/PI3K/FOXO1信号通路干预肾阳虚证糖尿病肾病的机制研究
批准号:
81860836
项目类别:
地区科学基金项目
资助金额:
36.0 万元
负责人:
谢毅强
依托单位:
学科分类:
H3108.中医内科学
结题年份:
2022
批准年份:
2018
项目状态:
已结题
项目参与者:
高湲、解丹丹、牛坤、杨帆、陈应奇、倪雅丽、姚宇剑
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中文摘要
糖尿病肾病因其较高的致死致残率给糖尿病患者和社会带来严重危害,临床治疗效果不佳,因此DN的防治非常重要。临床上缩泉益肾方治疗DN有效,但机制尚不明确。外泌体miR-2861的靶基因FOXO1是DN发生过程中重要信号途经INS/PI3K/FOXO1中的一个关键靶点。前期研究发现:益智仁对DN小鼠肾脏中,miRNA-378等2个上调,miRNA-129等5个下调,这些miRNA涉及到与DN相关的多条通路。本研究通过构建抑制miR-2861质粒及转染FOXO1慢病毒载体模型动物及高糖的肾小管上皮细胞,使用缩泉益肾方后,用real-timePCR观察miR-2861及INS、PI3K、FOXO1等mRNA的表达;Western blot、免疫细胞组化、ELISA检测INS/PI3K/FOXO1信号途径关键分子INS、PI3K、FOXO1等蛋白的表达水平,研究缩泉益肾方干预肾阳虚证糖尿病肾病的机制。
英文摘要
Diabetic nephropathy causes serious harm to diabetic patients and society due to its high lethality rate, and it’s clinical treatment effect was not significant.So DN’s preventive treatment is very important.In clinical treatment,suo-quan-yi-shen formula treat DN have effect,But the mechanism is unclear.FOXO1 gene is an important target in the INS/PI3K/FOXO1 signaling pathway,which is belong to exosome miR-2861 target gene.Previous studies have found that The efficacy of fructus alpiniae oxyphyllae for DN mice model’s kidney,will up-regulated two exosomes such as miRNA-378 and down-regulated five exosomes such as miRNA-129.And these miRNA involved multiple pathways related to DN.In this study, we construct the inhibition of mir-2861 plasmid and ransfected FOXO1 lentivirus virus vector model animal and high sugar renal tubular epithelial cells,after use suo-quan-yi-shen formula,we use real-timePCR to observe miR-2861 and INS、PI3K、FOXO1 etc mRNA’s expression;Western blot、Immunohistochem ical staining、ELISA detection INS/PI3K/FOXO1 signal pathway key molecules INS、PI3K、FOXO1 etc.Protein expression level,to research suo-quan-yi-shen formula intervene with kidney Yang deficiency type (syndrome types of TCM) and DN’s mechanism.
糖尿病肾病(DKD)发病率、死亡率高,给社会经济及人类健康造成严重的负担。缩泉益肾方(SQYSF)是基于海南地域因素结合DKD病证特点凝练而成的方剂,在肾阳虚型DKD早期的多尿期广泛应用,但机制尚不明确。本课题主要研究SQYSF通过调节外泌体miRNA-2861的表达干预INS/PI3K/FOXO1信号通路,进而发挥肾脏细胞保护的分子机制,为SQYSF治疗DKD提供科学依据。研究结果表明:在体内,SQYSF可有效降低DKD小鼠的血糖、UA、UCr及UN等水平,减轻肾脏组织病理性损伤,对DKD小鼠起到显著治疗作用。与db/m组比较,db/db组小鼠肾组织miRNA-2861表达水平上调、miR-346表达下调;经SQYSF干预后,小鼠肾组织miRNA-2861表达水平下调、miR-346表达上调;在体外,SQYSF含药血清能够提高高糖胁迫下HK2细胞的活力,降低凋亡率,且中剂量效果最优。与正常HK2细胞相比,经高糖干预后的细胞外泌体miRNA-2861的含量提高;SQYSF含药血清能够抑制高糖胁迫下细胞外泌体miRNA-2861的含量。这一研究结果说明外泌体miRNA-2861是SQYSF抗DKD的关键靶点。通过构建miRNA-2861 mimic/inhibitor载体,并将病毒载体转入HK2后,检测相关基因的表达,证实了高糖胁迫下的HK2细胞能通过促进miRNA-2861表达,进而促进INS、PI3K,抑制FOXO1的表达;SQYSF含药血清减轻高糖胁迫下的细胞损伤是通过下调miRNA-2861的表达进而抑制INS、PI3K及促进FOXO1的表达,进而发挥治疗作用。与此同时,课题组还探讨了miR-346在SQYSF抗DKD的作用机制。通过数据库预测及双荧光素酶基因报告实验验证Smad4 3'-UTR区域上存在miR-346的结合位点;通过构建miR-346 mimic/inhibitor载体,并将病毒载体转入HK2后,检测相关基因表达,证实高糖胁迫下的HK2细胞能通过下调miR-346进而促进TGF-β1/Smad4信号通路相关基因的表达,SQYSF含药血清减轻高糖胁迫下的细胞损伤是通过增强miR-346的表达进而抑制TGF-β1/Smad4通路发挥了其有效治疗作用。该课题研究SQYSF温肾补阳,保护肾阳虚型DKD的机制,为SQYSF临床治疗DKD提供科学依据。
期刊论文列表
专著列表
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专利列表
Effects of Alpinia oxyphylla on oxidative stress and expression of p47 phox in diabetic nephropathy rats
益智仁对糖尿病肾病大鼠氧化应激及p47 phox表达的影响
DOI:10.12032/tmrmhm202003061
发表时间:2020
期刊:TMR Modern Herbal Medicine
影响因子:--
作者:Xian Wang;Chang Liu;Mi Li;Yiqiang Xie;Kai Li
通讯作者:Kai Li
DOI:--
发表时间:2021
期刊:海南医学院学报
影响因子:--
作者:倪雅丽;姚宇剑;汤灿;黄小丹;谢毅强
通讯作者:谢毅强
DOI:10.3969/j.issn.1008-0805.2020.08.017
发表时间:2020
期刊:时珍国医国药
影响因子:--
作者:姚宇剑;倪雅丽;李想;黄小丹;肖曼;谢毅强;李丽
通讯作者:李丽
Prevalence and genotyping of Enterocytoon bieneusi in farmed black goats from the Hainan Province, the southernmost part of China
益智仁通过NLRP3炎症小体通路减轻大鼠糖尿病肾病
DOI:10.4103/1995-7645.268165
发表时间:2019
期刊:Asian Journal of Tropical Medicine
影响因子:--
作者:Huanhuan Zhou;Xinli Zhen;Tianming Ma;Zongxi Cao;Zhe Chao;Limin Wei;Quanwei Liu;Ruiping Sun;Feng Wang;Yan Zhang;Wei Zhao;Gang Lu
通讯作者:Gang Lu
Alpiniae oxyphylla fructus extract promotes longevity and stress resistance of C. elegans via DAF-16 and SKN-1.
益智仁提取物通过 DAF-16 和 SKN-1 促进线虫的寿命和抗应激能力
DOI:10.3389/fphar.2022.1034515
发表时间:2022
期刊:Frontiers in pharmacology
影响因子:5.6
作者:
通讯作者:
针对“伏邪微癥瘕”病机的缩泉益肾方通过circHIPK3竞争性结合miR-378d靶向调控KDM6A-KLF10反馈回路逆转糖尿病肾病EMT的机制研究
- 批准号:82174334
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:55万元
- 批准年份:2021
- 负责人:谢毅强
- 依托单位:
益智仁-乌药调控线粒体氧化应激治疗肾阳虚型糖尿病肾病的机制研究
- 批准号:81473618
- 项目类别:面上项目
- 资助金额:75.0万元
- 批准年份:2014
- 负责人:谢毅强
- 依托单位:
基于miRNA-21探讨药对益智仁-乌药影响PTEN/PI3K信号通路治疗糖尿病肾病的作用机制
- 批准号:81360586
- 项目类别:地区科学基金项目
- 资助金额:50.0万元
- 批准年份:2013
- 负责人:谢毅强
- 依托单位:
国内基金
海外基金















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