靶向自噬促进/结核分枝杆菌持留期抗原双相治疗性DNA疫苗研究

本课题成功构建了三种双相DNA疫苗pBudSP-IR1733c/2031c/2626c，共表达自噬诱导蛋白IRGM1和Mtb持留状态下特异表达的免疫优势抗原Rv1733c、Rv2626c和Rv2031c。其中IRGM1的表达采用巨噬细胞(MΦ)特异性启动子SP107进行控制，使其只能在MΦ中表达。细胞水平的研究显示，这些DNA疫苗可在巨噬细胞内表达IRGM1和Rv1733c、Rv2626c、Rv2031c，其中IRGM1的表达具有良好的巨噬细胞特异性。但由于这些质粒DNA疫苗转染巨噬细胞的效率很低，我们的结果显示上述疫苗转染后巨噬细胞的自噬水平并未按预期发生明显改变。因此，课题组未采用该质粒DNA疫苗进行后续功能及动物水平的研究，改为构建慢病毒载体。通过以pLenti-146-GFP慢病毒载体为表达框架质粒，课题组构建了慢病毒表达质粒pLenti-146-L-2031/2626，并通过包装获取了慢病毒颗粒。采用该慢病毒感染巨噬细胞，课题组检测到了各基因的表达，并检测到巨噬细胞自噬水平的上调。但以上述构建的慢病毒颗粒感染结核病模型小鼠，通过检测小鼠肺荷菌量、病理改变及小鼠存活期等指标，课题组未发现上述慢病毒疫苗对小鼠结核病具有治疗作用，原因可能在于系统性慢病毒感染后肺泡巨噬细胞的感染率低。