弓形虫体外感染巨噬细胞的蛋白组学研究

弓形虫是一种可寄生于多种宿主并引起人兽共患弓形虫病的专性细胞内寄生原虫。该病呈世界范围流行，严重危害人类健康。同时，该病给畜牧业生产带来巨大损失，因此，研究弓形虫入侵的相关因子，对于阐明弓形虫感染宿主细胞机制、筛选药物靶点和免疫逃避机制，进而对预防和控制这种社会性寄生虫病具有重大意义。.弓形虫进入动物体首先侵入的是巨噬细胞，同时，它又是自体重要的免疫细胞，具有抗感染、抗肿瘤和免疫调节等重要作用。本项目选择弓形虫感染的巨噬细胞作为研究对象，开展弓形虫体外感染巨噬细胞的蛋白组学研究。该研究不仅在蛋白水平上阐明弓形虫入侵细胞、免疫逃避的机制，也为弓形虫药物的开发和疫苗的研制提理论依据。. 本研究对不同基因型的4个弓形虫虫株速殖子的蛋白质组进行了荧光差异双向凝胶电泳（2D DIGE）分离，通过对凝胶图像分析，每块凝胶至少检测到2500个蛋白点，选择了110个显著上调或显著下调大于1.5倍以上的差异表达蛋白点，用基质辅助激光解析离子吸附飞行时间串联质谱（MALDI-TOF MS/MS）法进行质谱鉴定，将获得的质谱数据与弓形虫数据库和NCBInr数据库搜索查询，成功鉴定出99个显著差异蛋白点，属于57种蛋白质，包括热休克蛋白、己糖激酶、冠蛋白、蛋白磷酸酶2C、蛋白激酶C受体、肌动蛋白、联接蛋白、丙酮酸激酶、GRA5、GRA6、SAG2、MIC1、棒状体激酶家族蛋白和p36蛋白等。同时应用双向电泳（2-DE）技术结合MALDI-TOF MS/MS串联质谱技术对弓形虫基因Ⅰ型强毒株RH株速殖子感染和未感染小鼠24h后的巨噬细胞进行了蛋白质组比较。结果显示，每块凝胶至少检测到2500个蛋白点，其中显著差异表达蛋白点有108个，选择60个显著上调或下调的差异表达蛋白点进行质谱鉴定，成功鉴定出52个蛋白点，属于38种特定蛋白，包括肌动蛋白、膜联蛋白、波形蛋白、烯醇化酶、精氨酸酶、组织蛋白酶S、氨基酰化酶1和β-葡萄糖醛酸苷酶等。利用Uniprot Knowledgebase（Swiss-Prot/TrEMBL）和Gene Ontology database对鉴定成功的蛋白质从生物学过程、细胞组成和分分子功能三方面进行功能和定位分析，这些结果对于了解弓形虫和宿主巨噬细胞之间的相互关系奠定了基础，并且有助于阐明弓形虫致病的分子机制。