HBV利用CUL4B泛素连接酶促进病毒在宿主肝细胞中复制的新型分子机制研究

HBV持续感染可致肝硬化乃至肝癌发生，寻找调控HBV复制的关键宿主基因、阻断其感染进程至关重要。泛素-蛋白酶体途径参与调控HBV复制，详尽机制尚不明确。新型X连锁智力低下候选基因CUL4B属于CULLIN家族，参与调控细胞周期、DNA修复等众多生物学过程。本课题开展了CUL4B调控HBV复制的相关研究，并取得了以下几个方面的研究进展：1. 利用临床HBV感染肝组织标本和HBV转基因鼠肝组织标本，发现CUL4B表达与HBV复制水平（pgRNA和cccDNA水平）呈正相关；2. 利用HBV转染肝细胞模型和小鼠模型，通过体内外过表达、干扰或基因敲除、转基因修饰CUL4B，从体内外充分证实CUL4B对于HBV复制存在正向调控作用；3. 通过构建不同病毒蛋白缺失的HBV缺陷病毒质粒，筛选出HBx在CUL4B调控HBV复制中发挥关键作用，而polymerase和HBc蛋白不参与该过程；4. 通过体内外HBV感染模型，进一步证实CUL4B在HBx参与HBV复制过程中发挥重要作用；5. 利用CO-IP、免疫荧光等实验，证实HBx可与CUL4B复合体相互作用，且CUL4B可下调HBx泛素化修饰水平、抑制其蛋白酶体降解，进而上调HBx蛋白的表达，而HBx亦可上调CUL4B mRNA和蛋白表达，二者存在相互调节作用；6. 双荧光素酶实验提示，CUL4B尚可促进HBV核心启动子活性；7. 利用肝细胞特异性CUL4B基因敲除小鼠，证实肝细胞CUL4B可影响肝组织中NK细胞活化和IFN-r分泌；8. 通过cccDNA CHIP实验初步发现，CUL4B可结合至HBV cccDNA微染色质。本研究首次发现了CUL4B对HBV复制的调控作用，并从多个方面阐述了该作用的分子机制，为阐明HBV复制的调节机制提供思路，为揭示CUL4B全面生物学功能提供新依据。研究实施过程中，发表标注SCI论文4篇，2篇正在整理中；培养博士后1名，硕士研究生3名；参加国内外学术会议4次。