用于小鼠遗传操作的ФC31 重组酶系统的定向分子进化

目前，仍然缺乏有效的在小鼠基因组上进行位点特异整合的遗传操作系统。本项目拟以小鼠基因组MpsL1位点为靶点，以野生型ФC31整合酶为基础，利用易错PCR和DNA Shuffling方法，构建整合酶突变体库；经筛选得到选择标记的克隆；再以此为基础，经过多轮DNA Shuffling和筛选，以及在小鼠细胞系上进行整合效率和整合特异性分析，鉴定出更高整合特异性和整合效率的ФC31整合酶突变体。通过对ФC31整合酶突变体在序列和结构分析，将揭示ФC31整合酶的结构和功能的关系；因而可获得具有自主的知识产权。通过对attB位点序列进行定点突变，筛选出与ФC31整合酶突变体和小鼠基因组MpsL1位点相匹配的attB位点突变体，从而获得在小鼠基因组上高效的位点特异整合的ФC31整合酶组合系统；该系统将成为小鼠细胞遗传操作的有效工具，尤其将为在小鼠上进行基因功能分析和基因治疗的研究开辟新途径。