单纯疱疹病毒与ФC31整合酶的杂合性扩增子载体在哺乳细胞上介导位点特异整合的研究

为了解决基于单纯疱疹病毒(HSV)扩增子载体介导基因转移的基因不能长期持续表达的问题, 我们提出了杂合性HSV/ФC31整合酶扩增子载体能够有效介导转基因位点特异整合的假说。为此，我们拟以编码绿色荧光蛋白的基因为报告基因，将编码ФC31整合酶的基因及其识别的attB位点克隆于HSV扩增子载体，构建包括调控ФC31整合酶表达在内的多个杂合性HSV/ФC31扩增子载体；制备病毒并感染人胚胎肾细胞,经荧光细胞分选及单克隆培养，进行整合克隆数检测,分析整合效率;对整合克隆进行ФC31整合酶表达检测，分析对ФC31整合酶表达调控是否有效;重点利用LM-PCR和序列分析方法，对整合克隆进行大规模整合位点检测，分析位点特异性整合效率，利用生物信息学对整合位点进行高通量分析，建立假attP位点数据库，揭示位点特异性整合机制,为建立用于遗传病基因治疗的集高效性和安全性于一体的新型病毒载体系统开辟新途径。