Centrifugal elutriation of large fragile cells: isolation of RNA from fixed embryonic blastomeres.
Centrifugal elutriation of large fragile cells: isolation of RNA from fixed embryonic blastomeres.
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大的脆弱细胞的离心淘洗：从固定的胚胎卵裂球中分离 RNA。
DOI：
10.1016/0003-2697(92)90037-8
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发表时间：
1992
影响因子：
2.9
通讯作者：
Angerer,RC
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Nasir,A;Reynolds,SD;Keng,PC;Angerer,LM;Angerer,RC
为了分析存在于非常早期胚胎的不同细胞中的RNA群体，我们已经开发了一种使用逆流离心淘洗（CCE）来纯化这些大卵裂球的方案。该程序采用乙醇固定以稳定细胞抵抗CCE期间遇到的剪切力。使用这种方法，我们分离了16细胞海胆胚胎的三种不同的卵裂球类型，即小卵裂球、中卵裂球和大卵裂球，分别达到96%、94%和96%的平均纯度。我们在这里表明，完整的RNA回收效率相同，从每个卵裂球制备。使用这种方法，我们已经确定了几个RNA的分布不均匀的这些细胞。
In order to analyze the RNA populations present in different cells of very early embryos, we have developed a protocol to purify these large blastomeres using counterflow centrifugal elutriation (CCE). This procedure employs ethanol fixation to stabilize the cells against shear forces encountered during CCE. Using this method, we fractionated the three different blastomere types of the 16-cell sea urchin embryo, the micromeres, mesomeres, and macromeres, achieving 96,94, and 96% mean purities, respectively. We show here that intact RNA is recovered with equal efficiency from each blastomere preparation. Using this method, we have identified several RNAs that are distributed nonuniformly among these cells.
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