Charakterisierung und Modifikation der Substratspezifität clostridieller Neurotoxine

梭状芽胞杆菌神经毒素不能与神经递质相互结合，也不能作为神经递质，而不能作为神经递质。肉毒杆菌神经毒素(BONT)A，C和E蛋白水解物SNAP-25，Während VAMP/Synaptobrevin-2 das底物von BONT/B，D，F，G和Tetanus神经毒素(TENT)。Bot/C spaltet zusätzlich Synaxin-1.在此基础上，提出了一种新型的异构体，即异构体和异构体。他说：“我不知道怎么回事。”在德国，选择柴油发动机是一项非常重要的工程。您可以在LCA，B，D和帐篷中找到自己的身份和特征。在此基础上，我们将为您提供更多的信息和更多的信息。死于变种人的错误中。Für LCA和LCF Sollen ergänzend ather augewählte Bindungstaschen dh h héhlte Bindungstaschen dh héh l de Zufall smutagenese mutiert and SNAP-23 BZW.TI-VAMP Einem Hefegestützten Selektionsverfahren Ifiziert.

Clostridielle Neurotoxine unterbinden die Neurotransmitterfreisetzung von Nervenzellen, indem ihre katalytischen Domänen (LC) die an der neuronalen Exozytose beteiligten SNAREs spalten. Die Botulinusneurotoxine (BoNT) A, C und E proteolysieren SNAP-25, während VAMP/Synaptobrevin-2 das Substrat von BoNT/B, D, F, G und Tetanusneurotoxin (TeNT) ist. BoNT/C spaltet zusätzlich Syntaxin-1. Von allen drei Substraten existieren Isoformen, die andere Membranfusionsprozesse im intrazellulären Transportgeschehen katalysieren. Bis auf wenige Ausnahmen werden diese Isoformen nicht gespalten. In dem beantragten Projekt soll die molekulare Grundlage dieser Selektivität erarbeitet werden. Hierfür sollen die Substratbindungstaschen von LCA, B, D und TeNT identifiziert und durch Mutagenese charakterisiert werden. Basierend auf diesen Informationen und vorliegenden Kristallstrukturdaten sollen dann entscheidende Substratbindungstaschen derart verändert werden, dass die katalytische Aktivität dieser LCs auf SNAP-23 bzw. TI-VAMP/VAMP-7 erweitert bzw. umgelenkt wird. Dies soll durch gezielte Mutagenese erreicht werden. Für LCA und LCF sollen ergänzend auch ausgewählte Bindungstaschen durch saturierende Zufallsmutagenese mutiert und SNAP-23 bzw. TI-VAMP effizient spaltende LC-Mutanten mit einem hefegestützten Selektionsverfahren identifiziert werden.