Protease/Substrat-Interaktionen clostridieller Neurotoxine

梭菌神经毒素的蛋白酶/底物相互作用

• 批准号: 5078912
• 负责人: Dr. Thomas Binz
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Zellbiochemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1997-12-31 至 2002-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5078912?language=en
• 关键词: Protease; Substrat; Interaktionen; clostridieller; Neurotoxine

Die acht bekannten clostridiellen Neurotoxine spalten als Zinkabhängige Metalloproteasen mit hoher Selektivität die neuronalen Proteine Synaptobrevin, Syntaxin oder SNAP-25 und unterbinden damit die Kommunikation einer Nervenzelle mit ihrer Umgebung. In dem vorliegenden Fortsetzungsantrag soll die molekulare Charakterisierung der drei SNAP-25 spaltenden Proteasen fortgesetzt werden. Im Vordergrund steht nun die Untersuchung der Rolle einzelner Aminosäuren des "Substratgrabens" von BoNT/A L-Kette für die Wechselwirkung mit dem Substrat. An der Substratbindung beteiligte Aminosäuren sollen sowohl durch ortsspezifische Mutagenese als auch durch Kristallisation von SNAP-25/L-Kette-Komplexen identifiziert werden. Antworten auf die unterschiedlichen katalytischen Eigenschaften der drei SNAP-25 spezifischen L-Ketten werden aus der Kristallisation von BoNT/C und E L-Kette und anschließende Strukturvergleiche mit BoNT/A angestrebt. Erkenntnisse über den Mechanismus der Substraterkennung sollen durch kinetische Analysen mit "Stopped-Flow"-Messungen gewonnen werden.

梭状芽孢杆菌神经毒素通过选择性激活神经元蛋白突触小泡蛋白、突触融合蛋白或SNAP-25的锌离子金属蛋白酶分解，并与神经元结合。在该预成型堡垒中，三个SNAP-25的分子特性使蛋白质韦尔登成为可能。Im Vordergrund steht nun die Untersuchung der Rolle einzelner Aminosäuren des“Substratgrabens”von BoNT/A L-Kette für die Wechselenchung mit dem Substrat.通过SNAP-25/L-Kette-Komplexen鉴定韦尔登的结晶作用，也可以通过或通过特异性突变来确定底物结合的氨基酸。根据BoNT/C和EL-Kette的结晶作用以及与BoNT/A反应的稳定结构，对三种SNAP-25特殊的L-Ketten韦尔登进行了表征。通过“停流”--测量韦尔登的动力学分析，可确定出基质的溶解机理。