Engineering RNA-binding proteins and RNA-modifying enzymes to visualize mRNA localization in living cells

Eine räumliche组织mRNA在subzelluläre区域（mRNA本地化）发现在zahlreichen Zelltypen - von Bakterien bis hin zu Neuronen - statt和ermöglicht die räumliche和zeitliche调控der spezifischen基因表达。在神经细胞中，蛋白质生物合成<s:1> die synaptische Plastizität benötigt。在本地化、传输、翻译和Abbaus等方面的研究中，kenhnissee在Funktionsweise von Zellen和Organismen方面的研究中beträchtlich erweitern。mRNA动力学与转运研究进展，werden universell verwendbare Sonden benötigt， mRNA动力学与转运研究进展。我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是，我的意思是。Wir möchten RNA-Methyltransferasen unprogrammieren, damit sie Alkin-Gruppen transferieren, die mittelels Click- chemiiter modifizierden können。beder zweiten策略：在体内研究荧光蛋白与ssrna结合蛋白的序列特异性。Beide Ansätze zielen darauf ab, spezifische， lebenen Zellen的内源性rna， Zellen的内源性rna， Zellen的内源性rna， Zellen的内源性rna， Zellen的内源性rna， Zellen的内源性rna和sollen的内源性rna， Beispiel的内源性rna， Zellen的内源性rna和脆性X的内源性rna， Zellen的内源性rna和脆性X的内源性rna， Zellen和primären海马神经元的内源性rna。

Eine räumliche Organisation von mRNAs in subzelluläre Regionen (mRNA Lokalisation) findet in zahlreichen Zelltypen – von Bakterien bis hin zu Neuronen – statt und ermöglicht die räumliche und zeitliche Regulation der spezifischen Genexpression. In Neuronen wird die lokale Proteinbiosynthese für die synaptische Plastizität benötigt. Die Untersuchung der Lokalisation, des Transports, der Translation und des Abbaus von mRNA kann unsere Kenntnissee uber die Funktionsweise von Zellen und Organismen beträchtlich erweitern. Um die Dynamik von mRNA-Verteilung und -Transport zu erforschen, werden universell verwendbare Sonden benötigt, mit denen mRNA in lebenden Zellen sichtbar gemacht werden kann.Im vorliegenden Antrag schlagen wir zwei Strategien zur Visualisierung von RNA in lebenden Zellen vor: Die erste Strategie beruht auf einer chemo-enzymatischen Modifizierung von mRNA. Wir möchten RNA-Methyltransferasen umprogrammieren, damit sie Alkin-Gruppen transferieren, die mittels Click- Chemie weiter modifiziert werden können. Bei der zweiten Strategie beabsichtigen wir die Sequenzspezifitat des ssRNA-bindenden Proteins Pumilio zu verändern, indem wir Proteinkomplementierung eines fluoreszierenden Proteins in vivo nutzen. Beide Ansätze zielen darauf ab, spezifische, endogene RNAs in lebenden Zellen zu detektieren und sollen am Beispiel von mRNAs mit einem Bezug zu L1 und Fragile X letztendlich in Neuroblastom-Zellen und primären hippocampalen Neuronen der Maus getestet werden.