The elucidation of mechanisms and the development of novel therapeutic methods for mutant p53-induced EMT in lung cancer

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2022年度は、p53変異によるEMT活性化の相違を解析することで、EMTがどのよう経路が活性化しているかについて明らかに使用としている。今回、機能亢進型や機能抑制型など様々なタイプの変異型p53ベクターの作成を行い、現在まで合計10種類のHotspot変異型p53ベクターを作成した。それらのベクターによる肺癌細胞株への遺伝子導入を行い、structural type mutationよりもcontact type mutationでEMT活性が亢進していることが確認された。このうち、最もEMT活性化がみられる２種類やEMT活性みられない変異、negative controlの４種類のtransformed cellsをRNA-seq/miRNA-seqを行い、EMT活性化がみられるtypeにおける活性化経路を見出した。またEMTの際に活性化するシグナル経路であるArf6-AMAP1経路とPD-L1発現について解析を進めた。結果、AMAP1発現低下により、negative feedbackと考えられるEGFR経路の活性化が起こり、その結果として、PD-L1発現が上昇することを見出した。次にluciferaseを利用したpromoter reporter assayによるhigh through-put screeningの系を立ち上げ、TGFb誘導性EMT抑制薬として、７種類のcompoundを見出し、そのうち３種類はTGFb受容体阻害剤であり、我々の系の有効性が示され、これを論文化した。この系をEMTを起こす様々な細胞株に応用し、同様の実験を行うことを計画している。またEGFR変異transgenic mouseとp53変異transgenic mouseを入手し、それぞれの遺伝子型を確認して、交配をすすめている。