Die TIMP-1/MMP-9-Interaktion: Struktur/Funktionsanalysen in vitro und am Tiermodell akuter und chronisch fibrosierender Erkrankungen

基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在肝纤维化发生发展中的作用。肝纤维化患者肝组织TIMP-1的表达与自发性肝纤维化的关系及TIMP-1的表达。TIMP-1和基质金属蛋白酶-9(TIMP-9)在体内持续存在。用MMP9H401A、MMP9E402Q、MMP9E402H/H411E对TIMP-1进行诱变，体外检测TIMP-1结合情况。我是Tetrachlorkohlenstoff Industries FibroSemodell führen MMPs-9H401a和MMP一9E402Q nACH腺病毒，它们表达的是Leber3纤维样变。我们的基因治疗与纤维组织的毒性不同，它是由四个不同的基因组成的。人原发性胆管炎的肝纤维化组织学改变。抗纤维化药物(Smad7；抗转化生长因子β)Zur加入抗纤维化药物(CCl_4，Abcb4-/-，胆固醇酶，硫代乙酰胺(TAA))。我们知道，在TIMP-1的基础上，肝细胞(HSC)的抗癌作用可能会减弱。Der genaue Machismus(Rezeptoren？卡斯帕森？)对HSC、Primärkulturen、Verschiedenen、Mausfif-Semodellen等进行了研究。麻省理工学院激光扫描Mikroskopie(LSM)和荧光共振能量-传输凝胶和Nachweis einer内zellulären Komplexbildung von TIMP-1和基质金属蛋白酶-9。这是一种新的技术，它的主要功能是合成基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶-9，基质金属蛋白酶-9/基质金属蛋白酶-1，基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶-1，基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶-1，基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶-1，基质金属蛋白酶-9MIT CD44和转化生长因子β-9MIT CD44和转化生长因子和蛋白质凝胶电泳的差异。Aus DEM Vergleich der zellbiologischen Befund de für Mp-9 MIT denen für die MMP-9-mut erten wir Hinweise auf die in zelluläre and mamassozierte Funktion der TIMP-1/MMP-9-Interaktion Sowie auf Möglichkeiten der gezielten Interaktion Sowie auf Möglichkeiten der gezielten Interaktion Sowie auf Möglichkeiten der gezielten interaction.

Der Tissue inhibitor of metalloproteinases-1 (TIMP-1) spielt bei der Entwicklung und Progression der hepatischen Fibrose eine wichtige funktionelle Rolle. Da TIMP-1 kausal mit der Fibrogenese assoziiert ist und während der spontanen Fibrolyse eine verminderte TIMP-1 Expression beobachtet wurde, war unser Ziel eine spezifische Antagonisierung von TIMP-1 zur Reduktion der hepatischen Fibrose. TIMP-1 und MMP-9 bilden einen Komplex, der sich durch sehr hohe Bindungsaffinität auszeichnet. Durch rationale Mutagenese der MMP-9 gelang uns die Konstruktion von TIMP-1 Antagonisten (MMP-9H401A, MMP-9E402Q, MMP-9E402H/H411E), die enzymatisch nicht aktiv sind, weiterhin fest an TIMP-1 binden und in vitro die TIMP-1 Aktivität hemmen. Im Tetrachlorkohlenstoff induzierten Fibrosemodell führen MMP-9H401A und MMP-9E402Q nach adenoviraler Überexpression zu einer signifikanten Hemmung der Leber3 fibrose. Wir möchten diesen gentherapeutischen Ansatz auf ein nicht toxisches Fibrosemodell, die Abcb4-Knockout-Maus, übertragen. Die hepatische Fibrogenese der Abcb4-/- Maus ähnelt histologisch der humanen primär sklerosierenden Cholangitis. Außerdem soll geklärt werden, ob eine Kombination der TIMP-1-Antagonisten mit weiteren antifibrotischen Ansätzen (Smad7; anti-TGFβ) zur additiven oder synergistischen Fibrosehemmung in unterschiedlichen Mausmodellen führt (CCl4, Abcb4-/-, Cholestase, Thioacetamid (TAA)). Wir konnten zeigen, dass die Wirkung der TIMP-1 Antagonisten zu einer Apoptose der hepatischen Sternzellen (HSC) führt. Der genaue Mechanismus (Rezeptoren? Caspasen?) soll an HSC Primärkulturen und verschiedenen Mausfibrosemodellen untersucht werden. Mit Hilfe der Laser Scanning Mikroskopie (LSM) und des Fluoreszenz-Resonanz-Energie-Transfers gelang der Nachweis einer intrazellulären Komplexbildung von TIMP-1 und MMP-9. Die Bedeutung dieser Komplexbildung für die Synthesefunktion der Zellen, insbesondere für die Glykosylierung und den Grad der Prozessierung von MMP-9, die MMP-9/TIMP-1 Komplexaktivierung durch andere MMPs, sowie die Co- Lokalisation von MMP-9 mit CD44 und TGFβ sollen an zellbiolgischen Studien unter Verwendung eines proteomischen Ansatzes (2D-Gelelektrophorese, Difference in Gel Electrophoresis) sowie der LSM geklärt werden. Aus dem Vergleich der zellbiologischen Befunde für MMP-9 mit denen für die MMP-9-mut erwarten wir Hinweise auf die intrazelluläre und membranassoziierte Funktion der TIMP-1/MMP-9-Interaktion sowie auf Möglichkeiten der gezielten Intervention.