Extrasomatischer Transport und Translation von mRNA in Neuronen

我们认为，树突状细胞mRNA-Lokalisierung与MAP 2-和a-CaMK Ⅱ-mRNA的相互作用有密切的关系和机制。在第二阶段的研究中，我们采用了两种基于神经元初级培养的测试系统，即在transskripte识别的3 '-uniformtierten区域中的树突状mRNA-Lokalisierung，这两种测试系统都没有进行测序。在转基因小鼠中表达重组mRNA-Moleküle的方法是将体内顺式元件的功能进行验证。通过对转基因小鼠进行韦尔登试验，可将转基因小鼠与树突状细胞韦尔登结合，并进行体外蛋白质合成。一种90 kDa的Rattengehirns蛋白，在紫外交联试验中专门使用MAP 2-顺式元件。生化分析，一个肽序列分析。三杂交系统的中间产物是cDNA克隆，其杂交潜力是很大的。一种蛋白质，一种与黑腹果蝇相似的RNA结合蛋白，存在于神经元体树突中。在体内研究流感病毒蛋白质及其在稳定性、翻译和神经元mRNA分子外定位方面的作用，计划在基因不激活的情况下，在体内进行基因定位。

Ziel unseres Antrags ist, die Bedeutung und die Mechanismen der dendritischen mRNA-Lokalisierung am Beispiel der MAP2- und a-CaMKII-mRNA zu untersuchen. In der vergangenen Förderperiode haben wir in zwei auf neuronalen Primärkulturen basierenden Testsystemen cis-Elemente der dendritischen mRNA-Lokalisierung in den 3'-untranslatierten Regionen beider Transkripte identifiziert, die keine auffällige Sequenzhomologie zueinander besitzen. Um die Funktionalität dieser cis-Elemente in vivo überprüfen zu können, haben wir Vektoren zur Expression rekombinanter mRNA-Moleküle in transgenen Mäusen hergestellt. Mit Hilfe der transgenen Tiere soll zudem getestet werden, ob rekombinante Transkripte in Dendriten translatiert werden und wie die extrasomatische Proteinsynthese reguliert wird. Ein 90 kDa Protein des Rattengehirns, das in UV-Crosslinking Assays spezifisch mit dem MAP2-cis-Element interagiert, wird z.Zt. biochemisch angereichert, um eine Peptidsequenzanalyse zu ermöglichen. Mittels des Tri-Hybrid-Systems wurden cDNA-Klone isoliert, die poteintielle trans-Faktoren kodieren. Ein Protein, das Ähnlichkeiten zu dem an doppelsträngige RNA bindenden Protein Staufen von Drosophila melanogaster aufweist, ist in Neuronen somatodendritisch lokalisiert. Um den Einfluß dieses Proteins und anderer trans-Faktoren auf die Stabilität, Translation und extrasomatische Lokalisierung neuronaler mRNA-Molekulare in vivo untersuchen zu können, planen wir die Herstellung defizienter Mäuse, in denen die entsprechenden Gene inaktiviert wurden.