Kombinatorische Selektion von Anticalinen an immobilisierten Peptidkollektiven

Anticaline sind eine neuartige Klasse ligandenbindender Proteine mit molekularen Erkennungseigenschaften ähnlich den Antikörpern.这种新的蛋白质是通过脂质运载蛋白的进化性蛋白质设计获得的。在对芸苔细菌的BBP蛋白质进行组合分析时，发现了一种新的脂调蛋白质。16个氨基酸在维耶个肽类中的含量，这些结合剂的含量，会导致一个特定的突变。在3.7x10 8的通用图书馆中，噬菌体展示技术可以使突变蛋白与半抗原配体结合，如黄绿素和地高辛，选择性地结合。这一结果的获得是基于抗肿瘤技术的一种韦尔登，它与一种特异性结合蛋白的多肽测序方法，即一种聚合物转移材料或一种可供选择的蛋白质测序方法相平行。靶向肽序列测定可用于韦尔登的8000个N-末端六肽序列测定。Dieses（bzw. zu Testzwecken ein kleineres）Kollektiv soll mit einer geeignet randomisierten Bibliothek der Anticaline inkubiert韦尔登.在Gleichgewichtseinstellung sollen the Phagemide von jedem Peptid-Spot eluiert and deren Gensequenz sowie the funktionellen Eigenschaften der kodierten Anticaline analysiert韦尔登.在优化选择时，需要考虑多种肽序列的相互作用，并产生抗疟药的结合，因此，在理想下降中的斑点仅仅是一个或一个最小的抗疟药-人群韦尔登的Vertreter。噬菌体显示方法的重复性使其更易于检测。Die aus diesem Projekt resultierenden Antipeptide-Anticaline dürften nicht努尔als diagnosische Reagenzien im Rahmen der Proteomanalytik or der medizinischen Gewebetypsierung von Nutzen sein.在蛋白质的生物化学研究中，生物分子间的相互作用是Zellbiologie和Zellbiologie的重要组成部分。

Anticaline sind eine neuartige Klasse ligandenbindender Proteine mit molekularen Erkennungseigenschaften ähnlich den Antikörpern. Diese künstlichen Proteine wurden durch evolutives Protein Design ausgehend von Lipocalinen gewonnen. In einem kombinatorischen Ansatz wurde das Bilin-Bindungsprotein (BBP) aus P. brassicae erstmals verwendet, um Lipocalinvarianten zu konstruieren, die neue Liganden erkennen. Insgesamt 16 Aminosäuren in den vier Peptidschleifen, die die Bindungstasche bilden, wurden dazu einer gerichteten Zufallsmutagenese unterworfen. Aus der gewonnenen Bibliothek von 3,7x10 8 Mutanten wurden mittels der Phage Display-Technik künstliche Bindungsproteine vor allem für haptenartige Liganden, wie Fluorescein und Digoxigenin, selektiert. Ausgehend von diesen Resultaten soll die Anticalin-Technologie nun eingesetzt werden, um in parallelisierter Weise eine Vielzahl spezifischer Bindungsproteine gegen Peptidsequenzen, die an einem polymeren Trägermaterial ortsgebunden vorgegeben sind, zu erzeugen. Die Target-Peptidsequenzen sollen letztlich von 8000 N-terminalen Hexapeptidsequenzen humaner cytosolischer Proteine abgeleitet werden. Dieses (bzw. zu Testzwecken ein kleineres) Kollektiv soll mit einer geeignet randomisierten Bibliothek der Anticaline inkubiert werden. Nach Gleichgewichtseinstellung sollen die Phagemide von jedem Peptid-Spot eluiert und deren Gensequenz sowie die funktionellen Eigenschaften der kodierten Anticaline analysiert werden. Unter den zu optimierenden Selektionsbedingungen sollte ein Konkurrenzeffekt zwischen den diversen Peptidsequenzen einerseits und den zufällig generierten Bindungsstellen der Anticaline andererseits eintreten, so daß an jedem Spot im Idealfall nur ein oder zumindest wenige Vertreter der Anticalin-Population gebunden werden. Die sonst bei der Phage Display-Methode üblichen repetitiven Anreicherungszyklen könnten sich auf diese Weise erübrigen. Die aus diesem Projekt resultierenden Antipeptid-Anticaline dürften nicht nur als diagnostische Reagenzien im Rahmen der Proteomanalytik oder der medizinischen Gewebetypisierung von Nutzen sein. Darüber hinaus bieten sich vielfältige wissenschaftliche Anwendungen im biochemischen Studium von Proteinen, deren biomolekularen Interaktionen sowie der Zellbiologie an.