Protein Engineering eines die axonale Regenerierung im ZNS stimulierenden Antikörpers (IN-1) und Struktur-Funktionsanalyse seines Antigens Nogo-A

刺激中枢神经系统 (IN-1) 轴突再生的抗体的蛋白质工程及其抗原 Nogo-A 的结构功能分析

• 批准号: 5380456
• 负责人: Professor Dr. Arne Skerra, Ph.D.
• 金额: --
• 依托单位: Lehrstuhl für Biologische Chemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1996-12-31 至 2005-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5380456?language=en
• 关键词: Protein; Engineering; eines; die; axonale

Der myelinassoziierte Inhibitor Nogo-A des Nervenfaserwachstums liefert eine der Ursachen für das generelle Ausbleiben axonaler Regeneration im adulten Zentralnervensystem (ZNS) höherer Vertebraten. Im vorangegangenen Förderzeitraum konnte von uns eine lösliche, vermutlich extrazelluläre Domäne dieses auf Oligodendrozyten und im ZNS-Myelin membranständigen Proteins der Ratte funktionell in E. coli hergestellt und charakterisiert werden. Mit dessen Verwendung als rekombinantem 'Antigen' gelang es, das bakteriell produzierte Fab-Fragment des - ursprünglich gegen das native Nogo-A gerichteten - monoklonalen Antikörpers IN-1 (IgM/k) in seiner Affinität wesentlich zu verbessern. Das rekombinante Fab-Fragment neutralisiert die wachstumshemmende Wirkung von Nogo-A nicht nur in Zellkultur, sondern es stimuliert auch die axonale Regeneration nach Läsionen des ZNS in der Ratte. Dieses gut charakterisierte System soll nun als Grundlage dienen, um die Struktur und die weitgehend kryptische biochemische Funktion des Extramembranteils von Nogo-A auf mlekularerer Ebene zu analysieren. Zusätzlich soll das IN-1 Fab-Fragment im Hinblick auf evtl. spätere medizinische Anwendungen 'humanisiert' werden. Geplant ist unter anderem die bakterielle Produktion des homologen menschlichen Nogo-A Fragments und die verbesserte Präparation homogener Proteinproben zum Zweck (a) der funktionellen Optimierung des humanisierten IN-1 Fab-Fragments auf das humane Antigen, (b) der Identifizierung des Rezeptors in (tierischem) Nervengewebe sowie (c) der Röntgen-Strukturanalyse.

Nogo-A是一种神经纤维再生抑制剂，用于成年人脊椎动物中枢神经系统（ZNS）的轴索再生。在E. coli hergestellt und charakterisiert韦尔登。因此，通过重组“抗原”，在亲和层析中，将天然Nogo-A- monoklonalen Antikörpers IN-1（IgM/k）的Fab片段转化为免疫球蛋白。在Zellkultur中，Nogo-A的wachstumshemmende Wirkung不存在Fab片段的中和作用，因此也刺激了ZNS Läsionen在大鼠的轴突再生。该系统的主要特点是基本结构和Nogo-A的膜外生物化学功能。Zusätzlich soll das IN-1 Fab-Fragment im Hinblick auf evtl. spätere medizinische Anwendungen 'humanisiert'韦尔登。基因工程是在同源人源Nogo-A片段的制备和同源蛋白质的制备过程中进行的：（a）人源IN-1 Fab片段与人源抗原的功能优化;（B）神经网络中受体的鉴定;（c）放射性结构分析。