Mass spectrometric analysis of clock protein phosphorylation

本文介绍了两个昼夜节律蛋白质磷酸化的质谱分析项目。本文介绍了磷酸化蛋白定量分析的加权质谱法。这是一种精确灵敏度和准确度的分析方法。这两个项目的第二部分是关于蛋白质昼夜节律的研究方法。CircadianeUhren是一种内源性骨代谢物，是生理学和正常代谢中的一种代谢物（z.B. den Schlaf/Wach-Rhythmus）。Es konnte für die meisten beteiligten Uhr-Proteine gezeigt韦尔登，dass sie in vivo rhythmisch phosphorylert韦尔登。Dies scheint von zentraler Bedeutung für die Generierung von 24-Stunden Oszillationen zu sein，denn Mutationen，die zu Hypophosphorylierung（z.B. des Proteins PER 2 in Säugern）führen，haben dramatische Auschenkungen auf das Verhalten. Sängern的Uhr-蛋白质的磷酸化是一个未知的问题。这一项目是对磷的测定，也就是对昼夜节律中的磷进行定量分析。

Das hier beantragte Projekt zur massenspektrometrischen Analyse der Phosphorylierung von Proteinen der circadianen Uhr gliedert sich in zwei Teile. Ein Teil beinhaltet die Weiterentwicklung massenspektrometrischer Methoden zur Lokalisierung von Phosphorylierungsstellen sowie insbesondere zur quantitativen Analyse der Proteinphosphorylierung. Das angestrebte Ziel ist dabei eine Verbesserung der Analytik in puncto Sensitivität und Zuverlässigkeit. Der andere Teil des geplanten Projektes hat die Anwendung der verbesserten Methoden auf Proteine der circadianen Uhr zum Inhalt. Circadiane Uhren sind endogene Oszillatoren, die die tageszeitlichen Veränderungen in Physiologie und Verhalten regulieren (z.B. den Schlaf/Wach-Rhythmus). Es konnte für die meisten beteiligten Uhr-Proteine gezeigt werden, dass sie in vivo rhythmisch phosphoryliert werden. Dies scheint von zentraler Bedeutung für die Generierung von 24-Stunden Oszillationen zu sein, denn Mutationen, die zu Hypophosphorylierung (z.B. des Proteins PER2 in Säugern) führen, haben dramatische Auswirkungen auf das Verhalten. Die Phosphorylierungsstellen der Uhr-Proteine in Sängern sind bisher weitgehend unbekannt. Ein Ziel dieses Projektes ist die Bestimmung dieser Phosphorylierungsstellen, sowie die quantitative Analyse einzelner Phosphorylierungen in Abhängigkeit der circadianen Zeit.