Transfektion von Eimeria nieschulzi Sporozoiten mit Reportergen und Selektionsmarkern und anschließende Kultivierung in vitro

质粒konstrukte mit Sequenzen von Eimeria tenella （Etactin5’，Etmic5’）einem spezifischen Parasiten des Haushuhns, sollen in Bakterien hergestellt and anschließend in Sporozoiten von Eimeria nieschulzi, einem Parasiten der Ratte transfiziert werden。[3] [3] [3] [3] [3] [3] [3] [4] [3] [4] [4] [4]荧光标记物GFP的研究进展[j]。YFP die zunächst瞬态变换器。[2][1]陈志强，王志强，王志强，等。蛋白和肌动蛋白在小孢子虫和小孢子虫中的表达。和2。第一代。In einem zweiten Schritt sollen dann stabil transfizierte Sporozoiten, die Gene fgr In Mikronemen and / der Actin-Protein sowie In weiteres Apicoplastenprotein（酰基载体蛋白，acp） enthalten, hergestellt werden。2 .遗传序列分析：遗传序列分析，遗传序列分析，遗传序列分析，遗传序列分析。在Zellkulturen中，lassen sich transfizierte Merozoiten是2。Meronten-Generation heranzchten, die dann allerdings, ber einen Tierversuch auf den nat<s:1> rlichen Wirt, die Ratte, bertragen werden mssen。Über die reporterprotein läßt die verschiedenen基因表达während der Entwicklungsstadien (Merogonie in Zellkultur and Gamogonie im Wirtstier Ratte) nachweisen and microskopisch dokumentien。同时，研究人员还发现了一种新的研究方法，即在研究过程中发现变异基因<s:1>，在研究过程中发现<s:1>基因Hüllbildungskörper，在研究过程中发现。

Plasmid-Konstrukte mit Sequenzen von Eimeria tenella (Etactin5`, Etmic5`) einem spezifischen Parasiten des Haushuhns, sollen in Bakterien hergestellt und anschließend in Sporozoiten von Eimeria nieschulzi, einem Parasiten der Ratte transfiziert werden. Zur gezielten Selektion transfizierter Sporozoiten ist weiterhin eine Sequenz des DHFR-Gens einkloniert, das Resistenz gegen Pyrimethamin verleiht. Die transfizierten Sporozoiten sollen anschließend in Zellkultur zur Entwicklung gebracht werden und mit Hilfe der Fluoreszenzmarker GFP bzw. YFP die zunächst transienten Transformanten nachgewiesen werden. Erstes Teilziel ist, die Expression von Mikronemenprotein und Actin in lebenden Sporozoiten und Meronten der 1. und 2. Generation zu verfolgen. In einem zweiten Schritt sollen dann stabil transfizierte Sporozoiten, die Gene für ein Mikronemen und/oder Actin-Protein sowie ein weiteres Apicoplastenprotein (acyl carrier protein, acp) enthalten, hergestellt werden. Die Gensequenzen sollen gleichfalls mit den Reportergenen für GFP/YFP gekoppelt, ins Genom der Parasiten integriert werden. In Zellkulturen lassen sich transfizierte Merozoiten bis zu 2. Meronten-Generation heranzüchten, die dann allerdings über einen Tierversuch auf den natürlichen Wirt, die Ratte, übertragen werden müssen. Über die Reporterproteine läßt sich die Expression der verschiedenen Gene während der Entwicklungsstadien (Merogonie in Zellkultur und Gamogonie im Wirtstier Ratte) nachweisen und mikroskopisch dokumentieren. Als langfristiges Ziel ist nach erfolgreichem Abschluß der Teilziele die Herstellung von knock-out Mutanten für ein weiteres Gen, das für Hüllbildungskörper in Gamonten kodiert, vorgesehen.