Effect of snare complex zipping during large dense-core vesicle priming and fusion

[中英文摘要]Während der Exozytose form t sich zwitchen Vesikel and质膜der sogenannte Snare-Komplex，ein Bündel Aus vier a-Helices，gebildet von DEM VesikelProtein Synaptobrevin and den beiden质膜-Proteen SNAP-25 and Synaxin.Deses Bündel Hält Damit Vesikel and Plamambra zusamman(Bündel Hält Damit Vesikel and Plamambra zusamman)。Laut der‘Zipper’-(de：Reissverschluss-)在Richtung der C-Terminalen Membrverankerungen von Synaxin and synaptobrevin fort中，这些bildet sich der Komplex von den N-Teralen Enden，is Schlie？lich zur Membrverschmelzung füHRT。我不知道该怎么做，因为它有16种疏水接口，还有一种新型的疏水方法。死于错误，在SNAP-25中发生突变，而不是在疏水性氨基酸中发生突变。在SNAP-25-Null Mäuse-Chromaffinzellenüberexpremiert and Exozytose With MIT Methoden Untersuht(Kapazitanz-und KalziumMessungen；Ampersam e；Photoolytische Kalziumfreisetzung)中发现了多种蛋白质。Kinetische Analysen Müssen Dann duchgefüHRT Wen um Effekte auf Auslöung der Verschmelzung(‘触发’)von Effekten auf frühere Vesikel-Rekrutierungsschritte zu unterscheiden。这是一件非常重要的事情，因为这是一件很重要的事情，因为它是一种新的、更好的服务。研究了多种蛋白质的生物化学和分子动力学理论。

Während der Exozytose formt sich zwischen Vesikel und Plasmamembran der sogenannte SNARE-Komplex, ein Bündel aus vier a-Helices, gebildet von dem Vesikelprotein Synaptobrevin und den beiden Plasmamembran-proteinen SNAP-25 und Syntaxin. Dieses Bündel hält damit Vesikel und Plamamembran zusammen. Laut der 'Zipper'- (de: Reissverschluss-) Hypothese bildet sich der Komplex von den N-terminalen Enden in Richtung der C-terminalen Membranverankerungen von Syntaxin und Synaptobrevin fort, was schließlich zur Membranverschmelzung führt. Ich beabsichtige diese Hypothese zu untersuchen, indem ich die 16 hydrophoben Interaktionsschichten, die den Komplex zusammenhalten, gezielt verändere. Dies wird dadurch erreicht, dass durch Mutationen in SNAP-25 in jeder Schicht zwei größere hydrophobe Aminosäuren durch Alanin ersetzt werden. Die mutierten Proteine werden in SNAP-25-null Mäuse-Chromaffinzellen überexpremiert und Exozytose wird mit elektrophysiologischen Methoden untersucht (Kapazitanz- und Kalziummessungen; Amperometrie; photolytische Kalziumfreisetzung). Kinetische Analysen müssen dann durchgeführt werden um Effekte auf die Auslösung der Verschmelzung ('Triggering') von Effekten auf frühere Vesikel-Rekrutierungsschritte zu unterscheiden. Dadurch soll festgestellt werden, ob der SNARE-Komplex (der Reissverschluß) sich schon vor oder erst nach dem Kalziumsignal für Exozytose bildet, ob ein teilweise geformter Komplex mit dem verschmelzungsreifen ('primed') Zustand einhergeht, und ob die Bildungsrichtung N- bis C-terminal ist, wie die Hypothese postuliert. Die elektrophysiologischen Studien sollen durch biochemische und theoretische molekulardynamische Untersuchen der mutierten Proteine ergänzt werden.