A fluorescent reporter detecting precise homologous recombination transgenesis activity

点击翻译按钮获取中文摘要

The broad, long term objective and specific aims of the fast­track SBIR research are to create a  reagent, RecombiRED, for use in microinjection of embryos for identifying a subset of embryos  as recombination competent injections. The ability to quickly identify genome editing events in  an embryo allows researcher to quickly make precision animal models of human disease states.  Precise animal models allow for greater scientific understanding of a human disease and  provides a robust platform for drug discovery screening.  The RecombiRED reagent relies on  induced fluorescence in response to activation of homologous recombination repair within the  embryo.  Detection of homologous recombination repair in injected embryos with RecombiRED  allows animal husbandry and further screening efforts to be restricted to a subset of embryos by  up to 100x for having a desired precise knockin of new genetic material at a specific genetic  locus. The phase I research adapts a the RecombiRED reagent developed in C  . elegans model  organism to have the appropriate expression control elements enabling sufficient activity in  zebrafish embryo.  In Phase II, the additional research further optimizes parameters of the  RecombiRED reagent to minimize false positive and false negative readouts, which then allows  maximal forecasting of targeted genome edit events.  Finally, a set of 15 real­world transgenesis  projects are used as premarket beta­test to demonstrate the ubiquity and robustness of the  RecombiRED for simplifying discovery of genome editing in the creation of animals models for  use in drug discovery.