A rapid optical clearing protocol using 2,2'-thiodiethanol for microscopic observation of fixed mouse brain.
A rapid optical clearing protocol using 2,2'-thiodiethanol for microscopic observation of fixed mouse brain.
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使用2,2'-硫代二乙醇的快速光学清除方案，用于对固定小鼠脑的微观观察。
DOI：
10.1371/journal.pone.0116280
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发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Nemoto T
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Aoyagi Y;Kawakami R;Osanai H;Hibi T;Nemoto T
阐明神经回路功能需要对厚脑样本内部区域的神经元精细结构进行可视化。然而，激光扫描显微镜的组织穿透深度受到组织的光散射和/或吸收的限制。最近，已经提出了几种光学透明试剂用于固定样本的可视化。然而，它们需要复杂的方案或较长的治疗时间。在这里，我们报告了 2,2'-硫代二乙醇 (TDE) 溶液作为光学透明试剂对表达黄色荧光蛋白的固定小鼠大脑的影响。将固定大脑快速浸入 TDE 溶液中（对于 400 µm 厚的固定大脑切片，在 30 分钟内）可增加其透明度，并增强共焦和双光子显微镜中的穿透深度。此外，我们成功地在固定厚脑片的深层位置观察到沿单个树突的树突棘。这些结果表明，我们提出的使用 TDE 解决方案的方案是一种快速且有用的方法，用于光学清除表达荧光蛋白的固定样本。
Elucidation of neural circuit functions requires visualization of the fine structure of neurons in the inner regions of thick brain specimens. However, the tissue penetration depth of laser scanning microscopy is limited by light scattering and/or absorption by the tissue. Recently, several optical clearing reagents have been proposed for visualization in fixed specimens. However, they require complicated protocols or long treatment times. Here we report the effects of 2,2′-thiodiethanol (TDE) solutions as an optical clearing reagent for fixed mouse brains expressing a yellow fluorescent protein. Immersion of fixed brains in TDE solutions rapidly (within 30 min in the case of 400-µm-thick fixed brain slices) increased their transparency and enhanced the penetration depth in both confocal and two-photon microscopy. In addition, we succeeded in visualizing dendritic spines along single dendrites at deep positions in fixed thick brain slices. These results suggest that our proposed protocol using TDE solution is a rapid and useful method for optical clearing of fixed specimens expressing fluorescent proteins.
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