Cell cycle synchronisation of Trypanosoma brucei by centrifugal counter-flow elutriation reveals the timing of nuclear and kinetoplast DNA replication.
Cell cycle synchronisation of Trypanosoma brucei by centrifugal counter-flow elutriation reveals the timing of nuclear and kinetoplast DNA replication.
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DOI：
10.1038/s41598-017-17779-z
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发表时间：
2017-12-14
影响因子：
4.6
通讯作者：
Urbaniak MD
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Benz C;Dondelinger F;McKean PG;Urbaniak MD
我们报告了一种优化的离心逆流淋洗方案，用于快速和直接分离G1细胞周期前循环和血流形成阶段的同步种群，产生活的和增殖的细胞。同步化的高质量可以通过DNA含量的统一、窄的大小分布、同步分裂以及保持与后续细胞周期的同步性来判断。我们发现，早期洗脱组分代表了不同的G1亚群，它们在洗脱后以不同的时间分布在细胞周期中进展，例如观察到第二鞭毛基体在G1晚期成熟，DNA复制在S阶段，以及组蛋白H3在有丝分裂/胞质分裂中的二甲基化。我们使用我们的时间观察来构建一个与当前模型不同的关于核和动粒细胞周期的相对时间和持续时间的修订模型。
We report an optimised centrifugal counter-flow elutriation protocol for the rapid and direct isolation of G1 cell cycle synchronised populations of both the procyclic and bloodstream form stages of Trypanosoma brucei that yields viable and proliferative cells. The high quality of the synchronisation achieved can be judged by the uniform DNA content, narrow size distribution, synchronous division, and the maintenance of synchronicity into subsequent cell cycles. We show that early-eluting fractions represent different G1 subpopulations that progress through the cell cycle with distinct temporal profiles post-elutriation, as exemplified by the observation of the maturation of a second flagellar basal body in late G1 phase, DNA replication in S phase, and dimethylation of histone H3 in mitosis/cytokinesis. We use our temporal observations to construct a revised model of the relative timing and duration of the nuclear and kinetoplast cell cycle that differs from the current model.
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