Combining atomic force and fluorescence microscopy for analysis of quantum-dot labeled protein-DNA complexes.
Combining atomic force and fluorescence microscopy for analysis of quantum-dot labeled protein-DNA complexes.
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DOI：
10.1002/jmr.956
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发表时间：
2009-09
影响因子：
2.7
通讯作者：
Weiss, Shimon
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ebenstein, Yuval;Gassman, Natalie;Kim, Soohong;Weiss, Shimon
原子力显微镜(AFM)和荧光显微镜被广泛用于研究蛋白质与DNA的相互作用。虽然AFM擅长阐明结构细节和空间安排，但它缺乏区分复杂系统中类似大小物体的能力。通过特定部位的荧光标记，光学成像技术可以很容易地获取这些信息，从而能够同时直接检测和识别多个成分。在这里，我们展示了半导体量子点(QD)的使用，作为AFM地形和荧光成像的造影剂，促进了这两种成像技术的结合，并增加了基于流动的DNA延伸方法用于样品沉积，从而为蛋白质-DNA复合体的研究带来了一个强大的工具。我们通过对T7基因组DNA上的单个RNA聚合酶(RNAP)进行成像，展示了这种新技术组合的固有优势。
Atomic force microscopy (AFM) and fluorescence microscopy are widely used for the study of protein-DNA interactions. While AFM excels in its ability to elucidate structural detail and spatial arrangement, it lacks the ability to distinguish between similarly sized objects in a complex system. This information is readily accessible to optical imaging techniques via site-specific fluorescent labels, which enable the direct detection and identification of multiple components simultaneously. Here, we show how the utilization of semiconductor quantum dots (QDs), serving as contrast agents for both AFM topography and fluorescence imaging, facilitates the combination of both imaging techniques, and with the addition of a flow based DNA extension method for sample deposition, results in a powerful tool for the study of protein-DNA complexes. We demonstrate the inherent advantages of this novel combination of techniques by imaging individual RNA polymerases (RNAP) on T7 genomic DNA.
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作者：
Ebenstein, Y;Nahum, E;Banin, U
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Schwartz, David C.
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