A homogeneous immunoassay for the mycotoxin T-2 utilizing liposomes, monoclonal antibodies, and complement.
A homogeneous immunoassay for the mycotoxin T-2 utilizing liposomes, monoclonal antibodies, and complement.
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利用脂质体、单克隆抗体和补体对霉菌毒素 T-2 进行均相免疫测定。
DOI：
10.1016/0003-2697(87)90237-5
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发表时间：
1987
影响因子：
2.9
通讯作者：
Gaber,BP
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ligler,FS;Bredehorst,R;Talebian,A;Shriver,LC;Hammer,CF;Sheridan,JP;Vogel,CW;Gaber,BP
霉菌毒素T-2是一种真菌代谢物，已知会污染农产品并导致人类和动物中毒。我们开发了一种基于补体介导的脂质体裂解的T-2霉菌毒素同质竞争抑制试验。T-2真菌毒素转化为酸性氯衍生物，随后偶联到磷脂酰乙醇胺的氨基，并与磷脂结合成单层脂质体。羧基荧光素在高浓度下自猝灭，被包裹在脂质体中作为释放标记物。我们使用了T-2真菌毒素特异性的单克隆IgG1抗体和多克隆抗小鼠Ig作为二抗，因为抗T-2 IgG1不激活补体。在没有游离T-2的情况下，脂质体在加入补体后30分钟内被裂解，将羧基荧光素释放到周围的缓冲液中。在游离T-2毒素的存在下，抗体与脂质体的结合减少，导致裂解相应减少。该方法对低至2 ng的T-2毒素水平敏感，比目前使用相同抗体的酶免疫分析法灵敏度高10倍。
The trichothecene mycotoxin T-2 is a fungal metabolite known to contaminate agricultural products and cause intoxication of humans and animals. We have developed a homogeneous competition inhibition assay for T-2 mycotoxin based on complement-mediated lysis of liposomes. The T-2 mycotoxin was converted to an acid chloride derivative, subsequently coupled to the amino group of phosphatidylethanolamine, and incorporated with the phospholipid into unilamellar liposomes. Carboxyfluorescein, which is self-quenched at high concentrations, was entrapped in the liposomes as a release marker. We used a monoclonal IgG1 antibody specific for T-2 mycotoxin and a polyclonal anti-mouse Ig as a secondary antibody since the anti-T-2 IgG1 does not activate complement. In the absence of free T-2, the liposomes were lysed within 30 min after the addition of complement, releasing carboxyfluorescein into the surrounding buffer. In the presence of free T-2 toxin, the binding of antibodies to the liposomes was reduced, causing a corresponding decrease in lysis. This assay proved to be sensitive to T-2 toxin levels as low as 2 ng, which is 10-fold more sensitive than the present enzyme immunoassay using the same antibodies.
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