DnaB proteolysis in vivo regulates oligomerization and its localization at oriC in Bacillus subtilis.
DnaB proteolysis in vivo regulates oligomerization and its localization at oriC in Bacillus subtilis.
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DOI：
10.1093/nar/gkp1236
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发表时间：
2010-05
影响因子：
14.9
通讯作者：
Soultanas P
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Grainger WH;Machón C;Scott DJ;Soultanas P
oriC 处细菌 DNA 复制的启动是由原始体蛋白介导的，这些蛋白协同作用以融化富含 AT 的区域，在复制叉组装之前，复制解旋酶在该区域被加载。在枯草芽孢杆菌中，dnaD、dnaB 和 dnaI 基因对于 DNA 复制的启动至关重要。我们确定它们的 mRNA 在快速生长的异步培养物中得以维持。 DnaB 在其 C 末端以生长阶段依赖性方式被截短。蛋白水解仅限于细胞质，而不是膜相关的 DnaB，并影响寡聚化。相对于天然蛋白质，截短的 DnaB 在 oriC 处被耗尽。我们认为 DNA 诱导的寡聚化对其在 oriC 的作用至关重要，并且蛋白水解调节其在 oriC 的定位。我们发现 DnaB 有两个独立的 ssDNA 结合位点，一个位于残基 1-300 内，另一个位于残基 365-428 之间，以及一个位于残基 365-428 内的 dsDNA 结合位点。 DnaB 的四聚化在残基 1-300 内介导，DNA 依赖性寡聚化在残基 365-428 内介导。最后，我们表明 DnaB 与 oriC 的关联是不对称且广泛的。它涵盖从 dnaA 中部到 yaaA 末端的区域，其中包括在 DNA 复制起始阶段融化的富含 AT 的区域。
Initiation of bacterial DNA replication at oriC is mediated by primosomal proteins that act cooperatively to melt an AT-rich region where the replicative helicase is loaded prior to the assembly of the replication fork. In Bacillus subtilis, the dnaD, dnaB and dnaI genes are essential for initiation of DNA replication. We established that their mRNAs are maintained in fast growing asynchronous cultures. DnaB is truncated at its C-terminus in a growth phase-dependent manner. Proteolysis is confined to cytosolic, not to membrane-associated DnaB, and affects oligomerization. Truncated DnaB is depleted at the oriC relative to the native protein. We propose that DNA-induced oligomerization is essential for its action at oriC and proteolysis regulates its localization at oriC. We show that DnaB has two separate ssDNA-binding sites one located within residues 1–300 and another between residues 365–428, and a dsDNA-binding site within residues 365–428. Tetramerization of DnaB is mediated within residues 1–300, and DNA-dependent oligomerization within residues 365–428. Finally, we show that association of DnaB with the oriC is asymmetric and extensive. It encompasses an area from the middle of dnaA to the end of yaaA that includes the AT-rich region melted during the initiation stage of DNA replication.
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DOI：
10.1073/pnas.89.22.10915
发表时间：
1992-11-15
影响因子：
11.1
作者：
HENIKOFF, S;HENIKOFF, JG
通讯作者：
HENIKOFF, JG
影响因子：
14.9
作者：
Cole C;Barber JD;Barton GJ
通讯作者：
Barton GJ
影响因子：
3.3
作者：
ADAMS, JC
通讯作者：
ADAMS, JC
影响因子：
3.6
作者：
Bruand, C;Velten, M;Polard, P
通讯作者：
Polard, P
影响因子：
4.4
作者：
de Vries, YP;Hornstra, LM;Abee, T
通讯作者：
Abee, T