siRNA-mediated knock-down of DFF45 amplifies doxorubicin therapeutic effects in breast cancer cells.
siRNA-mediated knock-down of DFF45 amplifies doxorubicin therapeutic effects in breast cancer cells.
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siRNA 介导的 DFF45 敲低可增强阿霉素对乳腺癌细胞的治疗效果。
DOI：
10.1007/s13402-013-0157-1
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发表时间：
2013
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Sheibani,Nader
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bagheri,Fatemeh;Safarian,Shahrokh;Eslaminejad,MohamadrezaBaghaban;Sheibani,Nader
目的rna干扰（RNAi）已成为一种很有前途的癌症治疗工具。小干扰rna （sirna）可以协同增强用于癌症治疗的药物的细胞杀伤作用。在这里，我们研究了sirna介导的DNA片段因子45 （DFF45）基因沉默在存在和不存在阿霉素的情况下对乳腺癌细胞活力、细胞周期阻滞和凋亡的影响。方法设计3种sirna，分别靶向DFF45 mRNA的不同区域。通过实时RT-PCR和Western blot分析证实基因沉默。采用MTT法、PI染色法、膜联蛋白V结合法、caspase-3活性法、DNA阶梯法和染色质凝聚法检测DFF45 siRNA、阿霉素及其联合使用对T-47D和MDA-MB-231乳腺癌细胞的活性、细胞周期和凋亡的影响。结果流式细胞术分析发现，单独沉默DFF45对T-47D细胞的凋亡影响不大。然而，与阿霉素（0.33 μM）联合使用时，T-47D和MDA-MB-231细胞的凋亡数量分别增加了2.5倍和3倍（P< 0.05）。在联合治疗中，Caspase-3活性、染色质凝聚和DNA阶梯支持细胞凋亡的增加。在siRNA +阿霉素治疗后，两种细胞系的细胞周期阻滞水平均低于单纯阿霉素治疗。结论DFF45基因沉默联合阿霉素可能为乳腺癌的治疗提供一种新的治疗策略。
PurposeRNA interference (RNAi) has become a promising tool for cancer therapy. Small interfering RNAs (siRNAs) can synergistically enhance the cell killing effects of drugs used in cancer treatment. Here we examined the effects of siRNA-mediated DNA fragmentation factor 45 (DFF45) gene silencing on breast cancer cell viability, cell cycle arrest, and apoptosis in the presence and absence of doxorubicin.MethodsWe designed three siRNAs, which target different regions of the DFF45 mRNA. Gene silencing was confirmed by real time RT-PCR and Western blot analyses. The impact of DFF45 siRNA, doxorubicin, and their combination on the viability, cell cycle and apoptosis of T-47D and MDA-MB-231 breast cancer cells were determined by MTT, PI staining, annexin V binding, caspase-3 activity, DNA laddering, and chromatin condensation assays.ResultsBased on flow cytometric analyses, we found that silencing of DFF45 alone had little effect on apoptosis, especially in T-47D cells. However, when used in combination with doxorubicin (0.33 μM) a significant increase (P< 0.05) in apoptosis was observed in T-47D and MDA-MB-231 cells, i.e., ~2.5- and 3-fold, respectively. Caspase-3 activity, chromatin condensation, as well as DNA laddering supported increased apoptosis in the combinatorial treatment. Cell cycle arrest in both cell lines occurred at lower levels after siRNA + doxorubicin treatment compared to doxorubicin only.ConclusionsOur data indicate that DFF45 gene silencing, when applied in combination with doxorubicin, may offer a novel therapeutic strategy for the treatment of breast cancer.
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DOI：
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发表时间：
1979
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影响因子：
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作者：
Y. Okada
通讯作者：
Y. Okada
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