Localization of dichlorofluorescin in cardiac myocytes: implications for assessment of oxidative stress.
Localization of dichlorofluorescin in cardiac myocytes: implications for assessment of oxidative stress.
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二氯荧光素在心肌细胞中的定位：对氧化应激评估的影响。
DOI：
10.1152/ajpheart.2000.278.3.h982
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发表时间：
2000
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Sarvazyan,N
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Swift,LM;Sarvazyan,N
在分离的心肌细胞中评估了氧化剂敏感荧光探针 2'7'-二氯荧光素 (DCFH) 的定位和染色特征。心肌细胞迅速积累探针，并在无探针培养基中保持稳定水平的 DCFH 及其高荧光氧化产物二氯荧光素 (DCF) 1.5 小时。 DCF 与线粒体相关，由质子离子载体羰基氰-氯苯腙释放，但不由使质膜透化的皂苷释放。使用线粒体标记 MitoTracker Red 进行的实验也表明了 DCF 的线粒体分布，其中在活细胞中观察到 DCF 和 MitoTracker Red 之间的猝灭。分离的心脏线粒体迅速积累 DCF，高微摩尔浓度的探针抑制 ADP 刺激的呼吸速率。该研究为解释和设计 DCF 作为心肌氧化应激标志物的实验提供了重要的信息基础，并揭示了探针在线粒体中的优先定位。
Localization and staining features of the oxidant-sensitive fluorescent probe 2′7′-dichlorofluorescin (DCFH) were evaluated in isolated cardiac muscle cells. Cardiomyocytes rapidly accumulated the probe and retained steady levels of DCFH and its highly fluorescent oxidized product dichlorofluorescein (DCF) in probe-free medium for 1.5 h. DCF was associated with mitochondria and was released by the proton ionophore carbonyl cyanidem-chlorophenylhydrazone but not by saponin, which permeabilizes the plasma membrane. A mitochondrial distribution of DCF was also suggested by experiments with the mitochondrial marker MitoTracker Red, in which quenching was observed between DCF and MitoTracker Red in live cells. Isolated cardiac mitochondria rapidly accumulated DCF, and high micromolar concentrations of the probe inhibited ADP-stimulated respiration rate. The study provides an information base essential for the interpretation and design of experiments with DCF as a marker of oxidative stress in cardiac muscle and reveals preferential localization of the probe in mitochondria.
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