Development of a method for absolute quantification of equine acute phase proteins using concatenated peptide standards and selected reaction monitoring.
Development of a method for absolute quantification of equine acute phase proteins using concatenated peptide standards and selected reaction monitoring.
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开发一种使用串联肽标准品和选择反应监测对马急性期蛋白进行绝对定量的方法。
DOI：
10.1021/pr500607s
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发表时间：
2014
影响因子：
4.4
通讯作者：
Bundgaard L
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Bundgaard L
本研究的目的是开发一种定量测定方法，该方法可以支持马中一组急性时相蛋白（APP）的未来研究。该测定基于定量多联体（QconCAT）与选定的反应监测方法。选择了32个肽，对应于13个推定或确认的马属caballus（马）物种的APP，用于设计QconCAT构建体。合成了编码QconCAT的基因，并在大肠杆菌中表达了同位素标记的嵌合蛋白。在三重四极杆仪器上分析QconCAT胰蛋白酶肽，并在马血清、伤口组织和伤口间质液中评估定量特性。发现血清、伤口组织和间质液中的12、14和14肽分别具有合理的定量性能。七种蛋白质的绝对值进行了定量的血清中收集的马之前和之后的全身性炎症条件，所观察到的蛋白质浓度与以前的数据非常一致。我们的结论是，该QconCAT适用于血清中多种APP的同时定量分析，也可能支持这些蛋白质在其他类型的组织和体液从马的未来研究。
The aim of this study was the development of a quantitative assay that could support future studies of a panel of acute phase proteins (APPs) in the horse. The assay was based on a quantification concatamer (QconCAT) coupled to selected reaction monitoring methodology. Thirty-two peptides, corresponding to 13 putative or confirmed APPs for theEquus caballus(equine) species were selected for the design of a QconCAT construct. The gene encoding the QconCAT was synthesized and expressed as an isotope-labeled chimaeric protein inEscherichia coli. The QconCAT tryptic peptides were analyzed on a triple-quadrupole instrument, and the quantotypic properties were assessed in equine serum, wound tissue, and wound interstitial fluid. Reasonable quantotypic performance was found for 12, 14, and 14 peptides in serum, wound tissue, and interstitial fluid, respectively. Seven proteins were quantified in absolute terms in serum collected from a horse before and after the onset of a systemic inflammatory condition, and the observed protein concentrations were in close agreement with previous data. We conclude, that this QconCAT is applicable for concurrent quantitative analysis of multiple APPs in serum and may also support future studies of these proteins in other types of tissues and body fluids from the horse.
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