Molekulargenetische und biochemische Charakterisierung des pflanzlichen Mus81/Eme Endonuklease Komplexes

Der Mus81/Eme复合体在DNA修复和减数组织重组中的应用[j]。拟南芥同源基因von MUS81与EME的鉴定及转录调控研究[j]。interessanweise lidas EME Gen im Arabidopsisgenom dupliziert vor （AtEME1, AtEME2; Proteinidentität 63%）。在Voruntersuchungen konnten wir die endonucleleolytische Aktivität研究拟南芥Mus81/Eme1异质复合物的体外培养[j]。unsoll die生物化学特征分析与分析[j] .生物化学特征分析与分析[m] . Vergleich zu Mus81/Eme2 . die Substratspezifität]。Die Untersuchungen zur Substratspezifität sollen Aufschluss darber geben, ob Die complex analogder der Spalthefe spezifisch holiday Junction (HJ)-Resolvaseaktivität oder eher wie in Bäckerhefe Endonukleaseaktivität aufweisen oder sich unterscheiden in der Aktivität unterscheiden。Nachdem wir mehrere insertionsmutantten von A. thaliana isoliert and bereits Hinweise auf genomische Instabilitäten in mutanten MUS81-Hintergrund erhalten haben, soll parallel die funkserer Endonuklease in vivo geklärt werden。[3] [d] [d] [j] [j] .基因工程与基因工程。【摘要】研究了eme1和eme2基因的表达谱，分析了eme1和eme2基因的表达谱，分析了eme1和eme2基因的插入与突变，分析了eme1基因的表达与突变谱。schließ ßlich soll mittels生物化学与遗传学家Ansätze versucht werden dna - recombines - complex的相互作用-基因重组-涉及蛋白质，zum Beispiel den RecQ-Helikasen, nachzuweisen。

Der Mus81/Eme Komplex spielt bei allen daraufhin untersuchten Eukaryonten in der DNA Reparatur und meiotischen Rekombination eine entscheidende Rolle. Wir konnten in Arabidopsis thaliana homologe Gene von MUS81 und EME identifizieren und deren Transkription nachweisen. Interessanterweise liegt das EME Gen im Arabidopsisgenom dupliziert vor (AtEME1, AtEME2; Proteinidentität 63%). In Voruntersuchungen konnten wir die endonukleolytische Aktivität eines heteromeren Komplexes aus Mus81/Eme1 von Arabidopsis in vitro nachweisen. Nun soll die biochemische Charakterisierung dieses Komplexes vorangetrieben und dabei im Vergleich zu Mus81/Eme2 die Substratspezifität beider Komplexe analysiert werden. Die Untersuchungen zur Substratspezifität sollen Aufschluss darüber geben, ob die Komplexe analog zu dem der Spalthefe spezifisch Holliday Junction (HJ)-Resolvaseaktivität oder eher wie in Bäckerhefe Endonukleaseaktivität aufweisen oder sich sogar untereinander in der Aktivität unterscheiden. Nachdem wir mehrere Insertions-mutanten von A. thaliana isoliert und bereits Hinweise auf genomische Instabilitäten im mutanten MUS81-Hintergrund erhalten haben, soll parallel die Funktion dieser Endonuklease in vivo geklärt werden. Dabei wird mit Hilfe von transgenen Testerlinien die Beteiligung der Endonuklease an verschiedenen Rekombinationswegen (extra-, intra- und interchromosomale sowie meiotische Rekombination) geprüft. Da AtEME1 und AtEME2 eng gekoppelt sind, sollen neben der Untersuchung an Insertionsmutanten der einzelnen Gene Pflanzen mit RNA-Interferenz Konstrukten hergestellt und untersucht werden, bei denen die Expression beider EME-Gene ausgeschaltet ist. Schließlich soll mittels biochemischer und genetischer Ansätze versucht werden Interaktionen der Endonuklease-Komplexe mit anderen in DNA-Rekombinationsprozesse involvierten Proteinen, wie zum Beispiel den RecQ-Helikasen, nachzuweisen.