Regulation des Phosphoinositmetabolismus und der Clathrin-abhängigen Endozytose an chemischen Synapsen

磷脂酰肌醇(4，5)-双磷酸盐(PIP2)调节膜转运蛋白和胞外内切酶回收突触Vesikel。用磷脂酰肌醇4-磷酸5-激酶(PIPK)和磷脂酰肌醇-磷酸-磷酸合酶(Synaptojanin)调节磷脂酰肌醇代谢。[参考译文]Jüngste Studien konnten zeigen，dass aktitiitätsabhängieünderungen im exo-Endozytotischen Reccle Synaptischer Vesikel MIT erhöhten PIP2-Konzentationen im Präsynaptischen Komartiment eInhergehen.大麦蛋白-蛋白-维氏蛋白也有NMDA-Rezeptor-Induzierte NO/cGMPabhängie逆行信号。我是Rahman Dieses Projektes Sollen Molekulare Projektes，Projektes Sollen Molekulare机械师Der Reguled Des Phosphopinositexemismus and Sowie Deren Auswirkungen auf das Reccle Synaptischer Vesikel untersuht den.因此，PIPK ARF6和AP-2分子特征的接口和缺陷的Mutanten genutzt是唯一的接口。FERNER Sollen die Effekte von no and cGMP auf die Aktiität，den PhocorylierungsStatus and die subzelluläre Lokalization fp2-metabolisierenden ase PIPK Typly and Synaptojanin Gettet den.根据《条例》和《激励条例》的规定。磷脂酰肌醇-脂代谢递增酶(DEREN Bindung an Regulator Proteine Wie Arf6，Talin，AP-2)是一种内嗜性蛋白。翻译后修改柴油酶和他的合作伙伴Könnnenüber现代质量Verfahren aufgeklärt和Hernach Funktionell Charakterisiert是。我们用平面和突触后ZielProteine von NO和cGMP丝裂原cGMP和磷酸蛋白亲和层析、2D-Gel和MS分析，以及亚细胞蛋白质组1生化鉴定和功能鉴定。从现在开始，我们将继续努力，以此为基础来完成这项工作。Schlieülich ist vorgeseen，die Funktioneile Bedeutung no-Induziergen des fp2-Metoxismus and der Daran beteiligten EffektorProteind ch Kombination Pharmakologischer(NO-Scavenger，Non-Scavenger，Ganylyl-Zyclase-Inhibitoren)，zellbiologischer(Reccle-und LokalisationsStuddien Studdien in Synaposomen Primärkulturn-Neuronen)，生化学(在Synaposomen和Neurzunen中的应用)，和opscher Methoden(FM Fartischer回收，PH-EGFP-Lebendzendmikroskopie&fret)。

Phosphatidylinositol (4,5)-Bisphospat(PIP2) reguliert u.a. Membrantransportvorgänge wie die Clathrin-vermittelte Endozytose und das exo-endozytotische Recycling synaptischer Vesikel. Dabei unterliegt der Phosphoinositmetabolismus der regulatorischen Kontrolle FP2- metabolisierender Enzyme wie der Phosphatidylinositol 4-Phosphat 5-Kinase (PIPK) sowie der Phosphoinositolphosphat-Phosphatase Synaptojanin. Jüngste Studien konnten zeigen, dass aktivitätsabhängige Änderungen im exo-endozytotischen Recycling synaptischer Vesikel mit erhöhten PIP2-Konzentrationen im präsynaptischen Kompartiment einhergehen. Dabei sowohl regulatorische Protein-Protein-Wechselwirkungen als auch NMDA-Rezeptor-induzierte NO/ cGMPabhängige retrograde Signalkaskaden von besonderer Bedeutung zu sein. Im Rahmen dieses Projektes sollen molekulare Mechanismen der Regulation des Phosphoinositmetabolismus und sowie deren Auswirkungen auf das Recycling synaptischer Vesikel untersucht werden. So soll die Interaktion der PIPK mit Arf6 und AP-2 molekular charakterisiert und zur Erzeugung interaktionsdefizienter Mutanten genutzt werden. Ferner sollen die Effekte von NO und cGMP auf die Aktivität, den Phosphorylierungsstatus und die subzelluläre Lokalisation der FP2- metabolisierenden Enzyme PIPK Typly und Synaptojanin getestet werden. Dies beinhaltet Studien zur Regulation und Aktivität o.g. Phosphoinositlipid-metabolisierender Enzyme als auch deren Bindung an Regulatorproteine wie Arf6, Talin, AP-2 oder Endophilin. Posttranslationale Modifikationen dieser Enzyme und ihrer Bindungspartner können über moderne massenspktrometrische Verfahren aufgeklärt und hernach funktionell charakterisiert werden. Wir planen ferner prä- und postsynaptische Zielproteine von NO und cGMP mittels cGMP- und Phosphoprotein- Affinitätschromatographie, 2D-Gel und MS Analyse, und subcellular Proteomics1 biochemisch zu identifizieren und funktioneil zu charakterisieren. Um Änderungen der FP2-Konzentrationen in lebenden Zellen zu verfolgen, soll ein FRET-basierter Lebendzell-Assay etabliert werden. Schließlich ist vorgesehen, die funktioneile Bedeutung NO-induzierter Änderungen des FP2-Metabolismus und der daran beteiligten Effektorproteine durch Kombination pharmakologischer (NO-Donor, NO-Scavenger, Guanylyl-Zyklase-Inhibitoren), zellbiologischer (Recycling- und Lokalisationsstudien Studien in transfizierten Primärkultur-Neuronen), biochemischer (Applikation TAT-peptidtransduzierter Inhibitorproteine in Synaptosomen), und optischer Methoden (FM Farbstoff Recycling, PH-EGFP-Lebendzellmikroskopie & FRET) in Synaptosomen und lebenden Neuronen zu untersuchen.