Funktionelle Charakterisierung der Adaptorproteine Stonin 1 und gamma-BAR beim intrazellulären Membrantransport

细胞内膜转运过程中衔接蛋白 stonin 1 和 gamma-BAR 的功能表征

• 批准号: 5444305
• 负责人: Professor Volker Haucke, Ph.D.
• 金额: --
• 依托单位: Leibniz-Forschungsinstitut für Molekulare Pharmakologie (FMP)
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2003-12-31 至 2013-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5444305?language=en
• 关键词: Funktionelle; Charakterisierung; der; Adaptorproteine; Stonin

Intrazellulärer Membrantransport erfordert die Wechselwirkung von Adaptorproteinen mit Membran-Cargoproteinen und deren Sortierung in Transportvesikel. Von besonderer Bedeutung sind diese Prozesse in Neuronen, wo distinkte Membrandomänen, die axonale und die somatodendritische Plasmamembran, in der Trennung ein- und ausgehender Signale während der neuronalen Reizleitung impliziert sind. So sind in den vergangenen Jahren neue akzessorische Adaptorproteine wie Stonin 1 und 2, 2C18, HIP1, ARH, Hrs etc. identifiziert worden, welche spezialisierte Funktionen bei der Erkennung und Sortierung von Membranproteinen übernehmen. In dem vorgeschlagenen Projekt planen wir, durch Kombination molekulargenetischer, zellbiologischer und biochemischer Ansätze Einblicke in die Funktion der monomeren Adaptorproteine Stonin 1 und 2C18 im intrazellulären Membrantransport sowie der polaren Sortierung von Proteinen in Neuronen zu untersuchen. So sollen einerseits neue Interaktionspartner von Stonin 1 und 2C18 durch Hefe 2-Hybrid-Screens, Affinitätschromatographie und Ko-Immunpräzipitationsexperimente in Kombination mit RNA-Interferenz-Verfahren identifiziert und funktionell charakterisiert werden. Wir möchten darüberhinaus Einblicke in die putative Funktion dieser Adaptorproteine bei der intrazellulären Sortierung von Membran-assoziierten Proteinen gewinnen. Dazu sollen die physiologischen Effekte eines durch RNA-Interferenz induzierten Expressionsverlustes ('knockdown') von Stonin 1 oder 2C18 auf die Internalisierung und den intrazellulären Transport von Plasmamembran-Rezeptoren und axonalen Membranproteinen studiert werden. Ergänzend planen wir durch Isolierung und Charakterisierung von Transportvesikeln zusätzliche Einblicke in Stonin 1 bzw. 2C18-vermittelte Sortierungsvorgänge zu gewinnen. Schließlich möchten wir durch Erzeugung induzierbarer Knock-out Mauslinien die physiologische Rolle von Stonin 1 und 2C18 im organismischen Kontext sowie auf der zellulären Ebene untersuchen. Zur phänotypischen Analyse der erhaltenen Knockout-Mäuse sollen dann sowohl biochemische und zellbiologische Methoden, als auch elektrophysiologische Verfahren angewandt werden. Wir erwarten, dass die vorgeschlagenen Untersuchungen zu unserem grundlegenden Verständnis des polarisierten Membrantransportes insbesondere in Neuronen beitragen werden.

Intrazellulärer Membrantransport erfordert die Wechselechtening kung von Adaptorproteinen mit Membran-Cargoproteinen und deren Sortierung in Transportvesikel. Von besonderer Bedutung sind diese Prozesse in Neuronen，wo distinkte Membrandomänen，die axonale und die somatodendritische Plasmamembran，in der Trennung ein- und ausgehender Signale während der neuronalen Reizleitung impliziert sind.因此，近年来新发现了Stonin 1和2、2C 18、HIP 1、ARH、Hrs等适应蛋白，并对其进行了沃登，以确定其特异性功能。在本研究计划中，我们通过分子遗传学、生物学和生物化学的结合，研究了单体衔接蛋白Stonin 1和2C 18在细胞内膜转运过程中的功能，从而使蛋白质在神经元中的极性分选得以实现。因此，通过Hefe 2-Hybrid-Screens、Affinitätschromatographie和Ko-Immunpräzipitationsexperimente在联合使用RNA-干扰-Verfahren鉴定和功能性韦尔登中找到了Stonin 1和2C 18的新的相互作用伙伴。我们认为Einblicke在膜内整合蛋白质的推定功能中具有AdaptorProteine的功能。RNA干扰诱导Stonin 1或2C 18的表达降低（“敲低”）对韦尔登的内化和胞内转运的生理效应有待进一步研究。Ergänzend planen wir durch Isolierung und Charakterisierung von Transportvesikeln zusätzliche Einblicke in Stonin 1 bzw. 2C18-vermittelte Sortierungsvorgänge zu gewinnen.我们通过对Stonin 1和2C 18的生理作用进行敲除，使其在组织结构中的作用更加明显。通过生物化学和生物学方法对突变基因敲除小鼠进行表型分析，也可获得韦尔登。我们知道，在神经元韦尔登中，极化膜运输的垂直分布是非常重要的。

项目成果

Compromised fidelity of endocytic synaptic vesicle protein sorting in the absence of stonin 2

• DOI: 10.1073/pnas.1218432110
• 发表时间: 2013-02-05
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Kononenko, Natalia L.;Diril, M. Kasim;Haucke, Volker
• 通讯作者: Haucke, Volker

Gadkin negatively regulates cell spreading and motility via sequestration of the actin-nucleating ARP2/3 complex

• DOI: 10.1073/pnas.1206468109
• 发表时间: 2012-06-26
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Maritzen, Tanja;Zech, Tobias;Haucke, Volker
• 通讯作者: Haucke, Volker