Einfluss von Amniomembran-Transplantationen auf Makrophagen bei experimenteller herpetischer stromaler Keratitis: Der Einfluss auf die Apoptose, Zellteilung und Funktion von Makrophagen

[方法]将羊膜移植(AMT)移植到两种不同的移植方法中。我们对疱疹病毒性角膜炎(HSK)和多形性角膜炎(PMN)和T-Zellen进行了研究。这场战争(12小时每小时)是一场通过电子显微镜传播的战争，它是由Zahl von Phagozyten MIT的吞噬酶引起的。他说：“这是一种非常好的方式。”Möglicherweise könnnen Neue antientzündliche Treieansätze aufgrund dieser Erkenntnisse konzipiert.Ziel des Versuhsvorhaben ist ES，den Efluss von Amnionmenan(AM)ALS auf Makrophagen(CD L Lb+/F4/80+Zellen)在Hornhäuten MIT疱疹样间质型角膜炎和体外培养中移植。在AMT-Behandelten HSK-Hornhäuten Sollen Mittels Konfokaler Mikroskopie die Kolokalization von Makrophagenmarkern(CD11b，F4/80)和T Zellmarkern(CD3，CD4)中，MIT kostimulator ischen Molekülen untersusuht。MIT CD80(B7.1)，CD86(B7.2)，MHC-II和CD40的表达。CD3、CD28(CD80和CD86)、CD152(CTLA4、CD80和CD86)和CD40L)；采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(EL ISA)法检测血浆中IL-6、IL-12、TNF-α、IL-1和Chemokinen(CRG-2(IP-10)、CCL2(MCP-1))。Zudem被生产出了一种不同的胶粘剂。De Aoptose von ruhenden and aktivierten Makrophagen Wird Mittels Doublefärbung(Tunel/F4/80+oder CD11b+)untersuht。在体外，我们观察了Efluss von AM auf Makrophagen hrer，Zytokin，Chemokin-and no-Producktion，Phagozytose(Latexartikel，凋亡率)and Migration(Boyden-Chamber，Hornhäute MIT HSK untersuht Die Expression Kostimulatorischer Signal Wird Mittels Durchflu？zytometrie untersuht ht(U.A.B7.1/2，MHC-II，CD40)。我们对HSV-1的功能进行了分析。抗原特异性增殖和合胞分裂产物(Th1/2)Sollen dafür ALS？Aoptosezeichen ruhender and aktivierter Makrophagen Sollen DolchFlu？zytometrisch analysiert(TUNEL/F4/80+o.CD11b+，aktive Effektorcaspasen)。

Obschon unsere Arbeitsgruppe als auch andere eine antientzündliche Wirkung von Amnionmembran- Transplantation (AMT) bei Hornhautentzündungen beschrieben haben, ist der zugrunde liegende Mechanismus bislang unklar. Wir haben nach AMT bei ulzerativer herpetischer stromaler Keratitis (HSK) eine Apoptose von polymorphkernigen Zellen (PMN) und T- Zellen in der Hornhaut beobachtet. Wenige Stunden nach AMT (12h nach AMT) war im Transmissionselektronenmikroskop (TEM) eine vermehrte Zahl von Phagozyten mit phagozytierten apoptotischen Zellkörpern delektiert worden. Unser Tiermodell ermöglicht es, antientzündliche Mechanismen bei Hornhautentzündungen durch AMT zu untersuchen. Möglicherweise können neue antientzündliche Therapieansätze aufgrund dieser Erkenntnisse konzipiert werden. Ziel des Versuchsvorhaben ist es, den Einfluss von Amnionmembran (AM) als Transplantat auf Makrophagen (CD l lb+/F4/80+ Zellen) in Hornhäuten mit ulzerativer herpetischer stromaler Keratitis und in vitro zu untersuchen. In AMT-behandelten HSK-Hornhäuten sollen mittels konfokaler Mikroskopie die Kolokalisation von Makrophagenmarkern (CD11b, F4/80) und T Zellmarkern (CD3, CD4) mit kostimulatorischen Molekülen untersucht werden. Bei der Makrophagenpopulation steht die Ko-Expression von Makrophagenmarkern mit CD80 (B7.1), CD86 (B7.2), MHC-II und CD40 im Mittelpunkt. Bei T-Zellen soll die Anwesenheit von CD3, CD28 (Ligand von CD80 und CD86), CD152 (CTLA4, Ligand von CD80 und CD86) und CD40L); untersucht werden. Mittels Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) soll die Produktion von makrophagenspezifischen Zytokinen (IL-6, IL-12, TNF-a, IL-1) und Chemokinen (CRG-2 (IP-10), CCL2 (MCP-1)) in den Hornhäuten untersucht werden. Zudem werden die produzierten Stickstoffradikale gemessen. Die Apoptose von ruhenden und aktivierten Makrophagen wird mittels Doppelfärbung (TUNEL / F4/80+ oder CD11b+) untersucht. In vitro wird der Einfluss von AM auf Makrophagen hinsichtlich ihrer Proliferation, Zytokin-, Chemokin- und NO-Produktion, Phagozytose (Latexpartikel, apoptotische Zellen) und Migration (Boyden-Chamber, Hornhäute mit HSK untersucht Die Expression kostimulatorischer Signale wird mittels Durchflußzytometrie untersucht (u.a. B7.1/2, MHC-II, CD40). Die akzessorischen Funktionen auf HSV-1-spezifische T-Zellen werden analysiert. Die antigen spezifische Proliferation und die Zytokinproduktion (Th1/2) sollen dafür als Maßstab herangezogen werden. Apoptosezeichen ruhender und aktivierter Makrophagen sollen durchflußzytometrisch analysiert werden (TUNEL / F4/80+ o. CD 11b+, aktive Effektorcaspasen).