Einfluss einer schnellen Inaktivierung von Clathrin-Funktionen in einer Vertebratenzelllinie auf entscheidende zelluläre Prozesse

脊椎动物细胞系中网格蛋白功能快速失活对关键细胞过程的影响

• 批准号: 26416678
• 负责人: Dr. Petra Neumann-Staubitz
• 金额: --
• 依托单位: Department of Biochemistry
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Fellowships
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2005-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/26416678?language=en
• 关键词: Einfluss; einer; schnellen; Inaktivierung; von

Clathrin ist ein hoch konserviertes Protein und wichtig für den intrazellulären Vesikeltransport. Die Bedeutung von Clathrin-abhängigen und redundanten Endozyosewegen untersuchte man bisher mit verschiedenen ¿Knock down¿ Methoden. Sie haben aber den Nachteil, dass sich die Zelle bis zum Verschwinden des bis zu drei Tagen stabilen Clathrins adaptieren kann, und so das Versuchsergebnis verfälscht wird. Um diese Fehlerquelle auszuschließen, möchte ich in zwei verschiedenen Ansätzen chromosomale Clathrin-Mutanten erzeugen, die innerhalb von Minuten inaktivierbar sind: Hitze- und Laserlicht- inaktivierbares Clathrin. Da komplette Gendeletionen in Säugerzelllinien äußerst schwierig durchführbar sind, sich aber nur so viele Artefakte vermeiden lassen, werde ich eine Vertebratenzellinie benutzen, die eine einzigartig hohe homologe Rekombinationsrate aufweist. Gendeletionen sind hier einfach herstellbar. Mit diesen, für die mutanten Clathringene homozygoten Zelllinien, kann ich zum ersten Mal völlig neue Einblicke in zentrale Fragen des intrazellulären Vesikeltransportes bekommen: z.B. ob Clathrin-unabhängige Endozytosewege induzierbar sind und welche Faktoren dabei eine Rolle spielen, ob sich die Zusammensetzung der Lysosomen ändert, ob das Rezeptorrecycling gestört wird und ob es eine bestimmte Interaktionsabfolge während der ¿clathrin coated pit¿- Bildung gibt. Diese Erkenntnisse sind für die Grundlagenforschung und die angewandte medizinische Forschung wichtig, weil mit den hier vorgestellten Werkzeugen die Bedeutung von Clathrin klar herausgearbeitet werden kann.

网格蛋白是蛋白质和细胞内运输的重要组成部分。 Die Bedeutung von Clathrin-abhängigen 和冗余 Endozyosewegen untersuchte man bisher mit verschiedenen “Knock down” 方法。 Sie haben aber den Nachteil, dass sich die Zelle bis zum Verschwinden des bis zu drei Tagen stableen Clathrins Adaptieren kann, and so das Versuchsergebnis verfälscht wird. Um diese Fehlerquelle auszuschließen, möchte ich in zwei verschiedenen Ansätzen chromosomal Clathrin-Mutanten erzeugen, die insidehalb von Minuten inaktivierbar sind: Hitze- und Laserlicht- inaktivierbares Clathrin。 Da komplette Gendeletionen in Säugerzelllinien außerst schwierig durchführbar sind, sich aber nur so viele Artefakte vermeiden lassen, werde ich eine Vertebratenzellinie benutzen, die eine einzigartig hohehomologe Rekombinationsrate aufweist. Gendeletionen sind hier einfach herstellbar。 Mit diesen，对于突变体 Clathringene 纯合子 Zelllinien，可以看到 zum ersten Mal völlig neue Einblicke in zentrale Fragen des intrazellulären Vesikeltransportes bekommen：z.B.网格蛋白-unabhängige Endozytosewege induzierbar sind und welche Faktoren dabei eine Rolle spielen, ob sich die Zusammensetzung der Lysosomen ändert, ob das Rezeptorrecycling gestört und ob es eine bestimmte Interaktionsabfolge während der “网格蛋白涂层坑”- Bildung gibt。关于基本研究和医学研究的研究，我们将讨论网格结构的设计。