Einfluss einer schnellen Inaktivierung von Clathrin-Funktionen in einer Vertebratenzelllinie auf entscheidende zelluläre Prozesse

脊椎动物细胞系中网格蛋白功能快速失活对关键细胞过程的影响

• 批准号: 26416678
• 负责人: Dr. Petra Neumann-Staubitz
• 金额: --
• 依托单位: Department of Biochemistry
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Fellowships
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2005-12-31 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/26416678?language=en
• 关键词: Einfluss; einer; schnellen; Inaktivierung; von

Clathrin ist ein hoch konserviertes Protein und wichtig für den intrazellulären Vesikeltransport. Die Bedeutung von Clathrin-abhängigen und redundanten Endozyosewegen untersuchte man bisher mit verschiedenen ¿Knock down¿ Methoden. Sie haben aber den Nachteil, dass sich die Zelle bis zum Verschwinden des bis zu drei Tagen stabilen Clathrins adaptieren kann, und so das Versuchsergebnis verfälscht wird. Um diese Fehlerquelle auszuschließen, möchte ich in zwei verschiedenen Ansätzen chromosomale Clathrin-Mutanten erzeugen, die innerhalb von Minuten inaktivierbar sind: Hitze- und Laserlicht- inaktivierbares Clathrin. Da komplette Gendeletionen in Säugerzelllinien äußerst schwierig durchführbar sind, sich aber nur so viele Artefakte vermeiden lassen, werde ich eine Vertebratenzellinie benutzen, die eine einzigartig hohe homologe Rekombinationsrate aufweist. Gendeletionen sind hier einfach herstellbar. Mit diesen, für die mutanten Clathringene homozygoten Zelllinien, kann ich zum ersten Mal völlig neue Einblicke in zentrale Fragen des intrazellulären Vesikeltransportes bekommen: z.B. ob Clathrin-unabhängige Endozytosewege induzierbar sind und welche Faktoren dabei eine Rolle spielen, ob sich die Zusammensetzung der Lysosomen ändert, ob das Rezeptorrecycling gestört wird und ob es eine bestimmte Interaktionsabfolge während der ¿clathrin coated pit¿- Bildung gibt. Diese Erkenntnisse sind für die Grundlagenforschung und die angewandte medizinische Forschung wichtig, weil mit den hier vorgestellten Werkzeugen die Bedeutung von Clathrin klar herausgearbeitet werden kann.

网格蛋白是一种高浓度的蛋白质，可在细胞内进行转运。细胞骨架蛋白结合物和冗余内分泌物的结合物使人更容易被击倒。您已经在Nachteil，dass sich selle bis zum Verschwinden des bis zui Tagen stabilen Clathrins adaptieren kann，and so das Versuchsergebnis verfälscht wird.在这篇文章中，我发现了两个染色体的网格蛋白突变体，它们的内部结构是：Hitze-和Laserlicht-网格蛋白。Da komplette Gendeletion in Säugerzelllinien äußerst schwierig durchführbar sind，sich aber努尔so viele Artefakte vermeiden lassen，werde ich ich eine Vertebratenzellinie benutzen，die eine einzigartig hohe homologe Rekombinationsrate aufweist.性别歧视是一个很大的问题。因此，对于突变的Clathringene纯合子Zelllinien，我可以在中央Fragen des intrazellulären Vesikeltransportes bekommen：z.B.网格蛋白-未标记的内分泌物可以通过一个滚动的方式进行生产，也可以通过溶酶体的吸收，通过网格蛋白包被的培养物进行回收，这是一个最好的相互作用。这一成果对基础研究和应用医学研究都很重要，因为网格蛋白的基础研究成果可以韦尔登。