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significance and mechanism of parasitoid killing factors horizontally transmitted between insects and viruses

昆虫与病毒水平传播的拟寄生物杀伤因子的意义及机制

基本信息

批准号：
21H04723
负责人：
仲井まどか
金额：
$ 26.71万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-05 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

１-１） PKF のタンパク質発現と抗体作製：　バキュロウイルス由来のタンパク質発現ベクターを用いてPKFを発現させた。複数のベクターと大腸菌株の組み合わせを用いて、PKFの発現を試みた結果、PKFを多量に発現させる大腸菌とベクターの組み合わせを特定した。大腸菌で発現させたタンパク質をウエスタンブロッティングにより検出したが、不溶性のタンパク質になったので、可溶化する方法を検討する必要がある。また、C末側のペプチドを合成して抗体を作成した。また、in vitro translationを用いたタンパク質発現を試みた。１-２）　PKF欠損ウイルスの確立：　野生株のMySEVがそれぞれ感染した感受性細胞にトランスファーベクター（PKF 遺伝子にマーカー遺伝子を組換える）をトランスフェクションさせた。相同組換えによりPKF 遺伝子を欠損させたウイルス株をマーカー遺伝子の検出によりクローニングした（高務担当）。構築したPKF欠損MySEV株ついて東京農工大学で生物検定を行うために文部科学大臣確認実験の申請を行った。1-3）シロイチモジヨトウを用いたゲノム編集技術の確立：　PKFをゲノムに持つシロイチモジヨトウについて、ゲノム編集技術を用いてPKF遺伝子の欠損を行った。まず、シロイチモジヨトウのゲノムを解析した結果、PKF２遺伝子が日本のシロイチモジヨトウでは欠損していることが明らかになった。次に、Cryspr-Cas９システムによりPKF1遺伝子を欠損昆虫を作製した。最終的に、PKF1遺伝子を欠損した昆虫の作製に成功した（伊藤仲井担当）。

1-1) PKF Antibody production of バキュロウイルスのタンパク色発现ベクターを用いてPKFを発行させた. Plural のベクターとcoli strain の合わせを用いて, PKFの発成をtest みた knot Fruit, PKF is a large amount of coliform and a specific group of coliforms. coliform bacteria , insoluble のタンパク性になったので, soluble する method を検question するnecessary がある.また、C-terminal のペプチドをSynthetic して antibody was made by した.また, in vitro translation を Use いたタンパク性発向を trial みた. 1-2) PKF deficiency is established: the wild strain of MySEV infects the sensitive cells of the MySEV virus (PKF The legacy of the legacy is the legacy of the legacy. Same group replaced with えによりPKF The legacy of the legacy is the legacy of the legacy of the legacy family. The construction of PKF is based on the MySEV strain, Tokyo University of Agriculture and Technology, and the application is confirmed by the Minister of Education, Culture, Sports, Science and Technology. 1-3)シロイチジヨトウを's いたゲノム editing technology has been established: PKF をゲノムに志つシロイチモジヨトウについて, ゲノムediting technology を Use いてPKF 伝子の无码を行った.まず、シロイチモジヨトウのゲノムをanalytical result、PKF2缝子が日本のシロイチモジヨトウでは owed damage していることが明らかになった. Tsuji, Cryspr-Cas９システムによりPKF1 缝子を无码综合した. In the end, the production of PKF1's remaining insects was successful (Ito Nakai was in charge).