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Identification and characterization of novel mammalian phospholipase C

新型哺乳动物磷脂酶 C 的鉴定和表征

基本信息

批准号：
21J00197
负责人：
村上千明
金额：
$ 3.08万
依托单位：
Chiba University (2022)Shimane University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-28 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ホスホリパーゼC（PLC）は，グリセロリン脂質を加水分解し，生理活性脂質のジアシルグリセロール（DG）を産生する酵素群である．哺乳類のPLCで，ホスファチジルコリン（PC）やホスファチジルエタノールアミン（PE）を基質とするPLCは，哺乳類にて活性発見後40年以上分子実体（遺伝子）が不明であった．最近，我々は，スフィンゴミエリン合成酵素関連タンパク質 (SMSr)がPE，PC，ホスファチジルイノシトール（PI）等を加水分解しDGを産生するmulti-glycerophospholipid PLC hydrolase（MG-PLC）活性を示す「新タイプのPLC」であることを発見した．本研究ではSMSr/MG-PLCの機能解析を行い，MG-PLCの分子機構を明らかにすることを目的とした．本年度の主な成果として下記の3つがある．①当該酵素の生理的意義の解析準備のため，SMSrノックアウトマウスを新たに作製した（千葉大学バイオメディカル研究センターとの共同研究）．②SMSrの他にPC-PLC活性を示す酵素群を同定するために，SMSrの触媒部位を指標にPLC候補タンパク質をデータベース上で検索し，複数の候補分子を見出した．興味深いことに， MG-PLCと配列類似性の高いSMS isoform 1 (SMS1)がin vitroでPC-PLC活性を有することを発見した（投稿準備中）．③SMS1およびSMSr/MG-PLCの機能を調べたところ，DGキナーゼζ（DGKζ）と当該酵素が相互作用することを見出した（投稿中）．すなわち，SMS1およびMG-PLCは生体内でDGKζに近接し，DGをDGKζに供給する可能性がある．なお，研究代表者の特別研究員辞退（常勤研究職への採用）に伴い，本提案研究課題は当該年度で終了となる．　本研究で得た成果を基に，引き続き新規PLC酵素群の機能解析を行う．

The enzyme group that produces the physiologically active lipid is called PLC. Mammalian PLC (PC) is a molecular entity (DNA) that has been unknown for more than 40 years after mammalian activity was discovered. Recently, we have reported the activity of multi-glycoprotein PLC hydrolase (MG-PLC) in the production of DG by hydrolysis of PE, PC, PI, etc. This study is aimed at analyzing the function of SMSr/MG PLC and clarifying the molecular mechanism of MG PLC. The main achievements of this year are recorded below. (1) When preparing for the analysis of the physiological significance of the enzyme, SMSr started a new process of control (joint research of Chiba University). SMSr has other PC-PLC activity indicators, such as enzyme group identification, SMSr catalyst site indicator, PLC candidate, quality indicator, and multiple candidate molecules. SMS isoform 1 (SMS1) is in vitro and PC-PLC activity is in progress.③SMS1 and SMSr/MG-PLC function are regulated, DG is regulated (DGK) and when the enzyme interacts with each other, it is reported (in submission). SMS1 and MG-PLC are close to DGK in vivo and DG is likely to be supplied to DGK. In connection with the dismissal of the research representative and special researcher (the adoption of the regular research position), the research topic of this proposal is due to the end of the year. The results of this study are based on the functional analysis of PLC enzyme group.