Characterization of new mammalian phospholipase C

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ホスホリパーゼCはグリセロリン脂質を加水分解し，生理活性脂質のジアシルグリセロール(DG)を産生する．最近，我々はホスファチジルイノシトール（PI），ホスファチジルコリン（PC）やホスファチジルエタノールアミン(PE)等の複数種のリン脂質を水解しDGを産生するmulti-glycerophospholipid PLC hydrolase（MG-PLC）を発見した.一方，哺乳類PI-PLC，PE-PLCやPC-PLC活性は脂肪肝，ガンや動脈硬化症等と連関することが報告されているが，今までこれらの酵素の遺伝子が不明であった．本研究でMG-PLCが上記疾患と連関するのか否か，生理的意義に迫ることを目的としている．当該年度は，次の5つの研究成果が得られた．①MG-PLCのスプライスバリアントを2種発見し，当該酵素はDGキナーゼδと相互作用することを見出した．②MG-PLCノックアウトマウスを作製し，個体レベルにおける生理的意義の解析の用意を進めている．③MG-PLC以外の未知のPLCを探索・同定を実施するために，哺乳類細胞よりワンステップで高純度にリコンビナントタンパク質の精製を可能とする実験系を構築した④MG-PLCの触媒部位を指標にホモロジーサーチによるPLCの探索し，候補タンパク質を精製し，PLC活性を調べた結果，PC-PLC活性を示す膜タンパク質を2種（投稿準備中），PC-/PE-PLC活性を示す細胞質タンパク質を1種発見した（2023年度中に公表予定）．⑤同定した新規PLCがDGキナーゼと相互作用すること（DGK）を発見した（投稿中）．すなわち，当該酵素は細胞内でDGを産生し，近接したDGKにDGを供給することで新規DGシグナル伝達経路を形成する可能性がある．