Characterization of new mammalian phospholipase C

新型哺乳动物磷脂酶 C 的表征

基本信息

批准号：
22K15054
负责人：
村上千明
金额：
$ 3万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15054/
关键词：
ホスホリパーゼC ジアシルグリセロールスフィンゴミエリン合成酵素スフィンゴミエリン合成酵素関連タンパク質ホスファチジルコリン特異的ホスホリパーゼC PHOSPHO1 ジアシルグリセロールキナーゼ脂質生物学

项目摘要

ホスホリパーゼCはグリセロリン脂質を加水分解し，生理活性脂質のジアシルグリセロール(DG)を産生する．最近，我々はホスファチジルイノシトール（PI），ホスファチジルコリン（PC）やホスファチジルエタノールアミン(PE)等の複数種のリン脂質を水解しDGを産生するmulti-glycerophospholipid PLC hydrolase（MG-PLC）を発見した.一方，哺乳類PI-PLC，PE-PLCやPC-PLC活性は脂肪肝，ガンや動脈硬化症等と連関することが報告されているが，今までこれらの酵素の遺伝子が不明であった．本研究でMG-PLCが上記疾患と連関するのか否か，生理的意義に迫ることを目的としている．当該年度は，次の5つの研究成果が得られた．①MG-PLCのスプライスバリアントを2種発見し，当該酵素はDGキナーゼδと相互作用することを見出した．②MG-PLCノックアウトマウスを作製し，個体レベルにおける生理的意義の解析の用意を進めている．③MG-PLC以外の未知のPLCを探索・同定を実施するために，哺乳類細胞よりワンステップで高純度にリコンビナントタンパク質の精製を可能とする実験系を構築した④MG-PLCの触媒部位を指標にホモロジーサーチによるPLCの探索し，候補タンパク質を精製し，PLC活性を調べた結果，PC-PLC活性を示す膜タンパク質を2種（投稿準備中），PC-/PE-PLC活性を示す細胞質タンパク質を1種発見した（2023年度中に公表予定）．⑤同定した新規PLCがDGキナーゼと相互作用すること（DGK）を発見した（投稿中）．すなわち，当該酵素は細胞内でDGを産生し，近接したDGKにDGを供給することで新規DGシグナル伝達経路を形成する可能性がある．

磷脂酶C水解甘油磷脂并产生生理活性的脂质二酰基甘油（DG）。最近，我们发现了多甘油磷脂水解酶（MG-PLC），该水解水解了多种磷脂，例如磷脂酰肌醇（PI），磷脂酰胆碱（PC）和磷脂酰乙醇胺（PE），并产生DG。同时，据报道，哺乳动物PI-PLC，PE-PLC和PC-PLC活性与脂肪肝，癌症，动脉粥样硬化等有关，但是直到现在这些酶的基因尚未知道。这项研究旨在仔细研究MG-PLC是否与上述疾病有关的生理意义。在财政年度获得了以下五个研究结果。 1）我们发现了MG-PLC的两个剪接变体，发现该酶与DG激酶δ相互作用。 2）正在准备MG-PLC敲除小鼠，并进行准备工作以分析单个水平的生理意义。 ③为了搜索和识别MG-PLC以外的未知PLC，构建了一个实验系统，该系统能够在从哺乳动物细胞的一步中进行一步，使重组蛋白在一个步骤中纯化。 ④使用MG-PLC的催化位点作为指数，通过同源性搜索搜索PLC，净化候选蛋白，并检查了PLC活性。结果，发现了两种表现出PC-PLC活性的膜蛋白（用于发布）和一种具有PC-/PE-PLC活性的细胞质蛋白（计划在FY2023中发表）。 ⑤我们发现已鉴定出的新型PLC与DG激酶（DGK）相互作用（在Post）。换句话说，酶在细胞中产生DG，可以通过向相邻的DGK提供DG来形成新型的DG信号通路。