Identification of mammalian phosphatidylcholine-specific phospholipase C

哺乳动物磷脂酰胆碱特异性磷脂酶 C 的鉴定

基本信息

批准号：
18J20003
负责人：
村上千明
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J20003/
关键词：
ホスホリパーゼC グリセロリン脂質ホスファチジン酸ジアシルグリセロールスフィンゴミエリン合成酵素ジアシルグリセロールキナーゼホスファチジルコリン特異的ホスホリパーゼC 糖尿病シグナル伝達脂質 2型糖尿病ヘテロダイマー Sterile alpha motif (SAM) domain

项目摘要

2型糖尿病患者の骨格筋でのジアシルグリセロール（DG）キナーゼδ（DGKδ）の発現低下は本症増悪化の重要な決定因子である．本研究ではDGKδの関わる脂質代謝を解明するために，DGKδにDGを供給する上流経路の解明を目的とした．前年度までに，DGKδはDG産生酵素のスフィンゴミエリン合成酵素関連タンパク質 (SMSr) と，両者の有するオリゴマー形成モジュールのsterile α motif domain (SAMD)を介して直接相互作用することで，両者が機能的に連関し，SMSrはDGKδの上流経路（DG供給酵素）として機能する可能性を示した．SMSrはセラミドとリン脂質の一種であるホスファチジルエタノールアミン（PE）を基質としてDGおよびセラミドホスホエタノールアミン（CPE）を産生する「セラミド依存的DG産生酵素」である．不思議なことに，SMSrは細胞内で極微量のCPEしか合成できないことから，DGもほとんど産生しないと考えられていた．本研究の発見と従来の報告の矛盾から，SMSrはセラミド非依存的グリセロリン脂質水解・DG産生活性を持つのではないかと考え，次の通り調べた．昆虫細胞・バキュロウイルス発現系を用いて高純度にヒトSMSrを精製する実験系を構築し，精製SMSrのDG産生活性を調べた．予想に反して，精製SMSrはin vitroでホスファチジルコリン(PC)以外に，ホスファチジン酸，ホスファチジルイノシトール，PEなどグリセロリン脂質を加水分解し，DGを産生するMulti-glycerophospholipid PLC hydrolase (MG-PLC) 活性を示すことが明らかとなった．以上より，40年以上分子実体が不明だったPC特異的ホスホリパーゼCを発見したこと加え，意外にもヒトSMSrはMG-PLC活性を持つ新奇の多機能酵素であることを発見した．

2型糖尿病患者骨骼肌中二酰基甘油（DG）激酶δ（DGKΔ）的表达降低是该疾病加剧的重要决定因素。在这项研究中，我们旨在阐明向DGKδ提供DGKδ的上游途径，以阐明参与DGKδ的脂质代谢。到上一年，DGKδ通过无菌α基序结构域（SAMD）直接与产生DG产生的酶鞘磷脂合成酶相关蛋白（SMSR）相互作用，这两者都可以在功能上连接在一起，表明SMSR可以用作UpStream seplyseam seplysem的可能性（DG）。 SMSR是一种使用神经酰胺和一种类型的磷脂磷脂酰乙醇胺（PE）作为底物，可产生DG和神经酰胺磷酸乙醇胺（CPE）的“神经酰胺依赖性DG产生酶”。奇怪的是，SMSR只能合成细胞中非常少量的CPE，因此人们认为它几乎没有DG。基于这项研究的发现与先前的报告之间的矛盾，我们认为SMSR可能具有与神经酰胺无关的甘油磷脂水解和DG生产能力的矛盾，并进行了以下调查：构建了一种实验系统，以使用昆虫/杆状病毒表达系统和生产DGS的DGS纯化的能力将人类SMSR纯化为高纯度，以高纯度为纯度。与预期相反，已经表明纯化的SMSR水解甘油磷脂，例如磷脂酸，磷脂酰肌醇和PE体外，并在产生DG的多甘油磷脂水解酶（MG-PLC）中表现出多甘油磷脂。从上面，我们发现了PC特异性磷脂酶C，其分子实体已有40多年的历史，令人惊讶的是，人类SMSR是一种具有MG-PLC活性的新型多功能酶。

项目成果

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Analytical Method for Diacylglycerol Kinase ζ Activity in Cells Using Protein Myristoylation and Liquid Chromatography?Tandem Mass Spectrometry

使用蛋白质肉豆蔻酰化和液相色谱串联质谱分析细胞中二酰基甘油激酶 z 活性的分析方法

DOI：
10.1002/lipd.12201
发表时间：
2019
期刊：
Lipids
影响因子：
1.9
作者：
Honda Shotaro;Murakami Chiaki;Yamada Haruka;Murakami Yuki;Ishizaki Ayuka;Sakane Fumio
通讯作者：
Sakane Fumio

ジアシルグリセロールキナーゼδとスフィンゴミエリン合成酵素関連タンパク質の相互作用および機能連関

二酰甘油激酶δ与鞘磷脂合酶相关蛋白之间的相互作用和功能关系

DOI：
发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
0
作者：
村上千明;堺弘道;林康広;山下純;坂根郁夫
通讯作者：
坂根郁夫

ジアシルグリセロールキナーゼδはスフィンゴミエリン合成酵素関連タンパク質とsterile α motif domainを介して相互作用する

二酰甘油激酶 δ 通过无菌 α 基序结构域与鞘磷脂合酶相关蛋白相互作用

DOI：
发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
0
作者：
Chiaki Murakami;Fumi Hoshino;Hiromichi Sakai;Yasuhiro Hayashi;Atsushi Yamashita;Fumio Sakane;陸強，村上千明，星野史規，村上雄基，○坂根郁夫;陸強，村上千明，星野史規，村上雄基，○沼上雄紀，坂根郁夫;陸強，村上千明，星野史規，○坂根郁夫;村上千明，星野史規，堺弘道，林康広，山下純，坂根郁夫;陸強，村上千明，星野史規，坂根郁夫;Chiaki Murakami and Fumio Sakane;Chiaki Murakami and Fumio Sakane;村上千明，堺弘道，林康広，山下純，坂根郁夫;村上千明，堺弘道，林康広，山下純，坂根郁夫;村上千明，堺弘道，林康広，山下純，坂根郁夫;Chiaki Murakami and Fumio Sakane;村上千明，坂根郁夫
通讯作者：
村上千明，坂根郁夫

多彩な生理病理現象を制御する新奇ジアシルグリセロールリン酸化経路群

控制多种生理和病理现象的新型二酰甘油磷酸化途径组