Identification of mammalian phosphatidylcholine-specific phospholipase C

哺乳动物磷脂酰胆碱特异性磷脂酶 C 的鉴定

• 批准号: 18J20003
• 负责人: 村上 千明
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Chiba University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2021-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J20003/
• 关键词: ホスホリパーゼC; グリセロリン脂質; ホスファチジン酸; ジアシルグリセロール; スフィンゴミエリン合成酵素; ジアシルグリセロールキナーゼ; ホスファチジルコリン特異的ホスホリパーゼC; 糖尿病; シグナル伝達; 脂質; 2型糖尿病; ヘテロダイマー; Sterile alpha motif (SAM) domain

2型糖尿病患者の骨格筋でのジアシルグリセロール（DG）キナーゼδ（DGKδ）の発現低下は本症増悪化の重要な決定因子である．本研究ではDGKδの関わる脂質代謝を解明するために，DGKδにDGを供給する上流経路の解明を目的とした．前年度までに，DGKδはDG産生酵素のスフィンゴミエリン合成酵素関連タンパク質 (SMSr) と，両者の有するオリゴマー形成モジュールのsterile α motif domain (SAMD)を介して直接相互作用することで，両者が機能的に連関し，SMSrはDGKδの上流経路（DG供給酵素）として機能する可能性を示した．SMSrはセラミドとリン脂質の一種であるホスファチジルエタノールアミン（PE）を基質としてDGおよびセラミドホスホエタノールアミン（CPE）を産生する「セラミド依存的DG産生酵素」である．不思議なことに，SMSrは細胞内で極微量のCPEしか合成できないことから，DGもほとんど産生しないと考えられていた．本研究の発見と従来の報告の矛盾から，SMSrはセラミド非依存的グリセロリン脂質水解・DG産生活性を持つのではないかと考え，次の通り調べた．昆虫細胞・バキュロウイルス 発現系を用いて高純度にヒトSMSrを精製する実験系を構築し，精製SMSrのDG産生活性を調べた．予想に反して，精製SMSrはin vitroでホスファチジルコリン(PC)以外に，ホスファチジン酸，ホスファチジルイノシトール，PEなどグリセロリン脂質を加水分解し，DGを産生するMulti-glycerophospholipid PLC hydrolase (MG-PLC) 活性を示すことが明らかとなった．以上より，40年以上分子実体が不明だったPC特異的ホスホリパーゼCを発見したこと加え，意外にもヒトSMSrはMG-PLC活性を持つ新奇の多機能酵素であることを発見した．

The decrease in the development of skeletal muscle mass in type 2 diabetes mellitus is an important determinant of the progression of the disease. The purpose of this study is to clarify the relationship between DGK δ and lipid metabolism. DGKδ DG produces enzymes that are related to the synthesis of enzymes (SMSr) and the formation of enzymes that are related to the synthesis of enzymes (SAMD). SMSr shows the possibility of DGK delta upstream pathway (DG supplying enzyme) and function.SMSr is a kind of DGK delta lipid. Unbelievably, SMSr is the amount of dust in the cell and the amount of CPE in the cell. The results of this study are contradictory to previous reports. SMSr is independent of lipid hydrolysis and DG production activity. Insect cells are used to produce high purity SMSr. The purification system is constructed to purify SMSr and modulate DG production activity. Unexpectedly, in addition to refined SMSr in vitro de (PC), refined SMSr also produces acid, More than 40 years of molecular life is unknown, PC-specific, and unexpected. SMSr MG-PLC activity is novel and multifunctional.

项目成果

ジアシルグリセロールキナーゼδとスフィンゴミエリン合成酵素関連タンパク質の相互作用および機能連関

二酰甘油激酶δ与鞘磷脂合酶相关蛋白之间的相互作用和功能关系

• 发表时间: 2019
• 作者: 村上 千明;堺 弘道;林 康広;山下 純;坂根 郁夫
• 通讯作者: 坂根 郁夫

Analytical Method for Diacylglycerol Kinase ζ Activity in Cells Using Protein Myristoylation and Liquid Chromatography?Tandem Mass Spectrometry

使用蛋白质肉豆蔻酰化和液相色谱串联质谱分析细胞中二酰基甘油激酶 z 活性的分析方法

• DOI: 10.1002/lipd.12201
• 发表时间: 2019
• 期刊: Lipids
• 影响因子: 1.9
• 作者: Honda Shotaro;Murakami Chiaki;Yamada Haruka;Murakami Yuki;Ishizaki Ayuka;Sakane Fumio
• 通讯作者: Sakane Fumio

スフィンゴミエリン合成酵素関連タンパク質とジアシルグリセロールキナーゼδはsterile α motif domainを介して機能的に連関する

鞘磷脂合酶相关蛋白和二酰甘油激酶 δ 通过无菌 α 基序结构域进行功能连接

• 发表时间: 2020
• 作者: 馬場 健史;平山 明由;松田 史生;津川 裕司;村上千明，星野史規，堺弘道，林康広，山下純，坂根郁夫
• 通讯作者: 村上千明，星野史規，堺弘道，林康広，山下純，坂根郁夫

多彩な生理病理現象を制御する新奇ジアシルグリセロールリン酸化経路群

控制多种生理和病理现象的新型二酰甘油磷酸化途径组

• 发表时间: 2021
• 期刊: アグリバイオ
• 作者: Ishizaki Ayuka;Murakami Chiaki;Yamada Haruka;Sakane Fumio;坂根郁夫，村上千明，星野史規
• 通讯作者: 坂根郁夫，村上千明，星野史規

ジアシルグリセロールキナーゼδはスフィンゴミエリン合成酵素関連タンパク質とsterile α motif domainを介して相互作用する

二酰甘油激酶 δ 通过无菌 α 基序结构域与鞘磷脂合酶相关蛋白相互作用

• 发表时间: 2018
• 作者: Chiaki Murakami;Fumi Hoshino;Hiromichi Sakai;Yasuhiro Hayashi;Atsushi Yamashita;Fumio Sakane;陸強，村上千明，星野 史規，村上雄基，○坂根 郁夫;陸強，村上千明，星野 史規，村上雄基，○沼上雄紀，坂根 郁夫;陸強，村上千明，星野 史規，○坂根 郁夫;村上千明，星野史規，堺弘道，林康広，山下純，坂根郁夫;陸強，村上千明，星野 史規，坂根 郁夫;Chiaki Murakami and Fumio Sakane;Chiaki Murakami and Fumio Sakane;村上千明，堺弘道，林康広，山下純，坂根郁夫;村上千明，堺弘道，林康広，山下純，坂根郁夫;村上千明，堺弘道，林康広，山下純，坂根郁夫;Chiaki Murakami and Fumio Sakane;村上千明，坂根郁夫
• 通讯作者: 村上千明，坂根郁夫