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雄マウス求愛発声と性的動機づけを担うドーパミン神経投射経路の同定

鉴定负责雄性小鼠求爱发声和性动机的多巴胺神经元投射通路

基本信息

批准号：
21K03144
负责人：
菅野康太
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本実験では、ファイバーフォトメトリーによる神経活動観察と光遺伝学による神経活動の操作を、USVsの観察と同期記録しながら行う。本研究ではドーパミン (DA)神経系に着目しており、その神経活動の観察と神経活動操作をするための分子ツールを発現させる必要がある。DA神経系特異的に各種ツールの遺伝子を発現させるために、DA合成に必要な酵素であるチロシン水酸化酵素(TH)遺伝子のプロモーター下流でDNA組換え酵素であるCreを発現するアデノ随伴ウィルス (AAV)ベクター(TH::Cre)を用いる。さらに、分子ツールの遺伝子配列が逆向きに挿入されているAAVで、Cre存在下では組換えによりその向きが正常になり、遺伝子発現がなされるDIO(doublefloxed inverted open-reading-frame)のシステムを用い、Cre::THと特定の脳部位・回路で2重感染させることで、DA神経特異的に分子ツールを発現させる。分子ツールとしては、神経活動が上昇した際のカルシウムイオン濃度の上昇に応じて緑色蛍光の強度が増すCa2+センサーである GCaMP6を用いる。神経活動操作においては、560nm付近の光に応答し神経活動を抑制するArchTや、465nm付近の光に応答して神経を活性化(脱分極)させるチャネルロドプシン2(ChR2)を用いる。これらの手法を用いて、DA神経活動とUSVsの多さや複雑さとの因果を示し、さらに責任神経回路(投射経路)を機能的に同定する。これまでに、これらAAVの導入を済ませ、脳での発現確認を行った（AAV2retroによる特定の神経投射での逆光性感染も確認）。しかし、まだ仮説検証には至っていない。また、2個体間の発声の解析を進めるための実験系も別途開発し、論文として公開した。

In this paper, we observe the operation of the activities of the God of Light and Chemistry, and the operation of the activities of the God of Light and Chemistry, and the activities of the USVs. The purpose of this study is to observe the activities of the god, the god, the god, DA is responsible for the detection of essential enzymes in the synthesis of amino acid enzymes (TH), essential enzymes in water acidification enzymes (TH), and the production of DNA enzymes. Cre enzymes are used to detect the products that accompany the AAV products (TH::Cre). In the presence of Cre, there is a positive response in DIO (doublefloxed inverted open-reading-frame), a response in the circuit of a specific location, a reinfection virus in the circuit of a specific location, and a molecular marker in DA. The molecular system, the god activity, the light intensity, the Ca2+ intensity, the GCaMP6 intensity, the light intensity, the light intensity, the temperature, the temperature The operation of the god, the 560nm, the control of the god, the inhibition of the god, the ArchT, and the 465nm, the activity of the god, the activity of the The method of intriguing is to use the method of DA, the activity of USVs, the demonstration of cause and effect, the demonstration of cause and effect, and the determination of the mechanism of the loop (projection path). Please confirm that the AAV is not available, and that the AAV2retro is specific to the projection of adverse light infection. Please tell me, please tell me that I am sorry to hear that. The sound analysis of the two inter-body telephones is open to the public on other routes and documents.