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牛伝染性リンパ腫ウイルスの感染評価系の構築とエンベロープ多様性の解析

传染性牛淋巴瘤病毒感染评价体系构建及包膜多样性分析

基本信息

批准号：
21K05943
负责人：
小林朋子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

牛伝染性リンパ腫ウイルス（bovine leukemia virus: BLV）のエンベロープ配列は、BLVゲノム中で最も多様性に富むことから、遺伝子型の分類に使われており、これまでに11種類の遺伝子型が報告されている。この中で、最も世界に蔓延している遺伝子型は1型であり、最も家畜牛に効率よく感染するようなエンベロープ配列をもつ可能性がある。しかしながら、エンベロープ配列の違いが本当に感染性に影響しているかどうかについては、不明のままである。ウイルスタンパク質の機能は、プラスミドにクローニングしたウイルスゲノム配列に機能喪失変異や、機能付加変異を導入し、変異ウイルス粒子を作製し、その影響を定量することにより評価することができる。BLVゲノムを発現するプラスミドはいくつか報告されているが、ウイルス感染の初期段階を簡便かつ定量的に解析できる実験系はほとんど確立されていない。本研究では、感染性を定量可能なBLV感染性分子クローンの作製を目指し、蛍光タンパク質をレポーターとするBLV感染性分子クローンを作製し、培養細胞（293細胞）に形質導入した。そして、感染を定量化するために、フローサイトメーターにより蛍光タンパク質の発現を定量した。また、効率的なレポーターウイルス産生を実現するために、BLV粒子を恒常的に放出する羊腎由来株化細胞（FLK-BLV細胞）において発現しているMyc遺伝子およびRASA2遺伝子について、レンチウイルスベクターを用いて恒常発現細胞株の作製を行った。そして、BLV感染性分子クローンを形質導入し、感染性粒子の定量を行った。

The coloring system (bovine leukemia virus: BLV), the most versatile information in BLV, the most abundant information in the list, the most abundant information in the report, and the most abundant information in the report. In the middle of the world, the most spread in the world, the child type 1, the highest rate of infection in livestock and cattle, the possibility of infection. This is the case of infection, unknown infection. This means that the equipment can be lost, the machine can be added, the particles can be loaded, and the computer can be used in a quantitative way. In the BLV report, you need to know that in the early stages of the infection, the quantitative analysis is due to make sure that you are in good condition. In this study, the quantitative analysis of BLV infectious molecules may be used as the target, light, light, The amount of light was detected in the quantitative analysis of the infection. In this paper, we use the constant release of BLV particles to transform the cells (FLK-BLV cells) into cells (FLK-BLV cells). In this way, we can see that the cells are caused by the cells of the sheep (the cells of the sheep). The cells of the sheep (the cells of the sheep) are isolated from the cells (FLK-BLV cells). The cells of the sheep are isolated from the cells of the sheep (the cells of the sheep). The infectious molecules of BLV and infectious particles were injected into each other and the infectious particles were quantified.