Understanding molecular mechanism underlying Theileria orientalis transmission in the tick

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牛の小型ピロプラズマ症は本邦家畜牛に広く蔓延し大きな経済的被害をもたらしている。マダニへの原虫感染成立機序の理解はその防除につながり重要である。しかしながら病原性原虫であるタイレリアオリエンタリスがいかにしてマダニの免疫バリアを突破しているのかについての動態の詳細は全く明らかではない。そこで本研究では、免疫不全マウスタイレリア感染モデルを用いて、マダニの原虫感染時の遺伝子発現パターンを解析することを主な目的にした。さらに、複数の原虫が同時にマダニに感染することがタイレリア感染に何らかの干渉現象を及ぼしているという仮定のもと、野外マダニ個体内における原虫の共感染実態を明らかすることを目的にした。１年目で野外感染牛よりタイレリア原虫を分離し、マウスーマダニ感染実験系を確立し、実験の準備が整った。本年度は実験室継代フタトゲチマダニ幼ダニをタイレリア感染免疫不全マウスに吸血させ、感染マダニ唾液腺、感染マダニ中腸, 非感染マダニ唾液腺, 非感染マダニ中腸の４群の検体を準備した。これら一匹ごとの検体から微量RNAを抽出し、原虫感染の有無をリアルタイムPCRを用いて検出したのち、微量RNA増幅システムを用いて次世代シーケンスライブラリーを作成した。RNAseqは外注で行い、現在解析中である。一方、引き続きタイレリア汚染牧野の野外マダニの採取も行いDNAを抽出後、汎ピロプラズマプライマーを用いて増幅後、次世代シーケンサーを用いたアンプリコンシーケンスを行った。結果、多数のピロプラズマおよびその近縁種が同一マダニに混合感染している実態が明らかになった。１年度目に検出した、人への感染の可能性があるColpodella属原虫が再度検出され、新興感染症の原因となりうるマダニ媒介性原虫の北海道における存在がさらに裏付けられる結果であった。