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同じファミリーに属する転写因子間の標的遺伝子の特異性のコントロール

属于同一家族的转录因子之间靶基因特异性的控制

基本信息

批准号：
21K06017
负责人：
石井いずみ
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06017/
关键词：
Zic 転写調節因子結合モチーフホヤ転写因子結合特異性

项目摘要

発生過程は転写因子が協調して細胞の種類に応じ異なる標的遺伝子の発現を調節することで進行する。この過程で同じファミリーに分類される転写因子は、類似したDNA結合モチーフに特異的に結合するにも関わらず、異なる標的遺伝子の調節を行う例が報告されている。このような特異性がどのようにコントロールされているのかという問いの答えを探るために、本研究ではホヤ胚を用いて、２つのZic因子がどのようにして共通のまたは異なる標的遺伝子の発現を特異的に活性化しているかを明らかにすることを目的としている。令和４年度は、「Zic-r.aとZic-r.bの転写因子としての機能に違いがあるかを明らかにする。」ために、以下の実験を行った。①２つのZic因子の各細胞内のタンパク質量を比較するために、抗Zic-r.b抗体を作成した。この抗体を用いた抗体染色のプロトコルを確立し、予定神経索、脊索、筋肉、間充織前駆細胞の核でZic-r.bタンパク質を検出することができた。②Zic-r.aとZic-r.bの結合モチーフへの結合親和性を比較するために、Zic下流遺伝子のシス調節領域内のZic結合モチーフ類似配列とZic因子の結合親和性をゲルシフトアッセイにより解析した。また、Zic因子による標的遺伝子の転写調節の特異性には、Snailなどのリプレッサーによる転写抑制も関与していると考えられる。したがって、「リプレッサーによる抑制を明らかにする」ために、SnailのChIP解析および、モルフォリノオリゴによる機能阻害胚のtranscriptome解析を行った。

The process of growth is coordinated by the factors that are written and the types of cells that are different from each other. The genetic factors that are different from each other are regulated and carried out. The process is the same as the classification of the される転factor, similar to the DNA binding function The specific にcombination するにも关わらず, the different なるstandard remaining 伝子のregulatory row うcase が report されている. The specificity of the specificityうQuestion いのanswer えをExploration るために、This study uses いて、２つのZ The ic factor is the same as the common one. Specific activation of the activation of the purpose of the activity. Reiwa 4th year は、「Zic-r.aとZic-r.bの転写factorとしてのThe function is the same as the following. ①2 The quality of the Zic factor in each cell was compared and the anti-Zic-r.b antibody was prepared.このantibodyを Use いたantibody to stain the のプロトコルをestablishedし, predetermined nerve cord, notochord, and muscles , mesenchymal tissue before the nucleus of the cell, Zic-r. ②Zic-r.a and Zic-r.b's binding affinity, Zic's obscene residual 伝子のシThe binding affinity of the Zic factor in the regulation field is similar to that of the Zic factor, and the binding affinity of the Zic factor is analyzed. Sna ilなどのリプレッサーによる転WRITE Suppression も关与していると卡えられる. ChIP Analysisおよび, モルフォリノオリゴによる function-impaired embryo のtranscriptome analysis を行った.