同じファミリーに属する転写因子間の標的遺伝子の特異性のコントロール

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発生過程は転写因子が協調して細胞の種類に応じ異なる標的遺伝子の発現を調節することで進行する。この過程で同じファミリーに分類される転写因子は、類似したDNA結合モチーフに特異的に結合するにも関わらず、異なる標的遺伝子の調節を行う例が報告されている。このような特異性がどのようにコントロールされているのかという問いの答えを探るために、本研究ではホヤ胚を用いて、２つのZic因子がどのようにして共通のまたは異なる標的遺伝子の発現を特異的に活性化しているかを明らかにすることを目的としている。令和４年度は、「Zic-r.aとZic-r.bの転写因子としての機能に違いがあるかを明らかにする。」ために、以下の実験を行った。①２つのZic因子の各細胞内のタンパク質量を比較するために、抗Zic-r.b抗体を作成した。この抗体を用いた抗体染色のプロトコルを確立し、予定神経索、脊索、筋肉、間充織前駆細胞の核でZic-r.bタンパク質を検出することができた。②Zic-r.aとZic-r.bの結合モチーフへの結合親和性を比較するために、Zic下流遺伝子のシス調節領域内のZic結合モチーフ類似配列とZic因子の結合親和性をゲルシフトアッセイにより解析した。また、Zic因子による標的遺伝子の転写調節の特異性には、Snailなどのリプレッサーによる転写抑制も関与していると考えられる。したがって、「リプレッサーによる抑制を明らかにする」ために、SnailのChIP解析および、モルフォリノオリゴによる機能阻害胚のtranscriptome解析を行った。