ErbB4の部位特異的糖鎖解析による糖鎖機能の解明

通过 ErbB4 的位点特异性聚糖分析阐明聚糖功能

• 批准号: 21K06083
• 负责人: 高橋 素子
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K06083/
• 关键词: 糖鎖; ErbB4; 増殖因子受容体; 質量分析; ErbB; EGFR; Glycosylation; N-glycan

ErbBファミリーは、EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4の４つの分子からなる増殖因子受容体ファミリーであり、いずれもがんの発症・進展に深く関与していると考えられている。特にEGFRやErbB2はがん治療のターゲット分子として臨床応用されているが、ErbB4の関連疾患はがんから精神疾患と幅広く、その機能についても未知の部分が多い。研究代表者はこれまでにEGFR、ErbB2、ErbB3の糖鎖解析を行い、糖鎖の機能を検討してきた。本研究では、ErbB4の部位特異的糖鎖構造解析を行い、糖鎖によるシグナル制御機構を検討した。令和4年度の研究では、以下の結果が得られた。１）ErbB4の部位特異的糖鎖付加率および糖鎖構造：CHOK1細胞で発現させたヒトErbB4の細胞外ドメインを精製し、LC-ESI-MS/MSを用いて11か所の糖鎖付加ポテンシャル部位における糖鎖付加率と糖鎖構造を解析した。糖鎖付加率に関してはN146とN448の２か所は50%以下と低かったのに対し、他の部位は概ね高い付加率を示した。特にN113、N333はほぼ100%の糖鎖付加率だった。また、N113、N228、N523の３か所は高マンノース型糖鎖、それ以外の８か所は複合型糖鎖が付加することがわかった。２）ErbB4の機能に重要な糖鎖の同定：CHOK1細胞を用いてErbBの野生型および糖鎖欠損変異体の安定発現細胞を樹立した。ヘレグリン刺激に対するシグナルを比較する予定であったが、タンパク質の発現量が非常に低く、シグナル検出量が一定しなかった。現在、その原因を検討している。３）ErbB4細胞外ドメインの糖鎖欠損変異体の性質の評価： ErbB4の細胞外ドメインはEGFシグナルとヘレグリンシグナルの両方を抑制することを確認し、その糖鎖欠損変異体の性質を検討している。

ErbB, EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4 and 4 are the four most important factors in growth factor receptor development. In particular, EGFR and ErbB2 have been used to treat mental disorders and unknown parts of the body. The study representatives are investigating the analysis and function of EGFR, ErbB2 and ErbB3 glycans. In this study, we analyzed the site-specific glycan structure of ErbB4 and investigated the glycan control mechanism. The following results were obtained from the 4-year study. 1) site-specific glycan binding rate and glycan binding structure of ErbB4: CHOK1 cells were detected and purified. LC-ESI-MS/MS was used to analyze the glycan binding rate and glycan binding structure of ErbB4. The sugar lock rate is lower than 50% in N146 and N448, and the other parts are higher than 50% in N448. Especially N113 and N333 have a 100% sugar lock increase rate. 3 of N113, N228 and N523 are high sugar chains and 8 of N523 are complex sugar chains. 2) The function of ErbB4 is important for the identification of glycogen: CHOK1 cells are used to establish stable cells with wild-type ErbB and glycogen deficiency. For example, if a stimulus is used, the amount of the stimulus is very low and the amount of the stimulus is constant. Now, the reason for this is discussed. 3) Evaluation of the properties of ErbB4 extracellular domain with glucolock deficiency: The inhibition of EGF and EGF in ErbB4 extracellular domain was confirmed and the properties of all glucolock deficiency were discussed.

项目成果

ヒトErbB2(HER2)の部位特異的糖鎖構造解析

人 ErbB2 (HER2) 的位点特异性聚糖结构分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 藤谷 直樹;上原 康昭;長谷川 喜弘;橋本 宇吉郎;有木 茂;高橋 素子
• 通讯作者: 高橋 素子

ヒトRANKの糖鎖による機能制御メカニズムの解析

糖链对人类RANK的功能控制机制分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 上原 康昭;藤谷 直樹;長谷川 喜弘;有木 茂;橋本 宇吉郎;岡本 弘美;高橋 素子
• 通讯作者: 高橋 素子

METの糖鎖による機能制御メカニズムの解析

糖链对MET功能调控机制分析

• 发表时间: 2021
• 作者: 齋藤淳;長谷川喜弘;藤谷直樹;有木茂;上原康昭;松本邦夫;高橋素子
• 通讯作者: 高橋素子

Site-specific analysis of N-glycans of receptor tyrosine kinases

受体酪氨酸激酶 N-聚糖的位点特异性分析

• 发表时间: 2023
• 期刊: Trends in Glycoscience and Glycotechnology
• 影响因子: 0.3
• 作者: Takahashi Motoko;Fujitani Naoki;Uehara Yasuaki;Hasegawa Yoshihiro
• 通讯作者: Hasegawa Yoshihiro

FGFR1の糖鎖の部位特異的構造解析と機能解析

FGFR1 糖链的位点特异性结构和功能分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 岡本弘美;藤谷直樹;上原康昭;長谷川喜弘;橋本宇吉郎;有木茂;白土明子;○高橋素子
• 通讯作者: ○高橋素子