オーファン受容体Adgrf5による糸球体濾過障壁の恒常性維持機構の解明

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本研究は、糸球体血管内皮細胞におけるAdgrf5の作用機構をshear stress応答に着目してその細胞内情報伝達経路を明らかにし，Adgrf5シグナリングが関与する濾過障壁の構造維持とその異常による病態発症の分子機構を解明すること目的としている。今年度は、１）Shear stress応答時のAdgrf5シグナリングの解明と２）血管内皮透過性に関与する細胞構造体への影響の解明にむけて解析を行った。１）については、前年度にADGRF5とshear stress応答との関係を見いだせなかったが、その後の解析によってADGRF5をの発現量の高い安定発現株を作製したところ、ERK1/2のリン酸化が定常状態で上昇することを認めた。このリン酸化はADGRF5をノックダウンすると低下したことから特異性があるものと判断した。さらに、この細胞株に対してシェアストレス刺激を与えると、コントロール細胞に比べてERK1/2のリン酸化応答が長時間持続することを認めた。以上の結果から、ADGRF5はシェアストレスによる細胞応答を増強する効果があることが示唆された。２）については、腎臓切片に対してトマトレクチンを用いたグリコカリックスの染色を行ったところ、ADGRF5欠損マウスでは野生型マウスに比べて毛細血管内皮における染色強度が弱かった。また、定量PCR解析によって糸球体内のMMP-9（グリコカリックスを分解することで知られる）の遺伝子発現量がADGRF5欠損マウスで低下していた。前年度のグリコカリックス構成分子の遺伝子発現低下と併せると、ADGRF5欠損によりグリコカリックス形成不全が生じて糸球体濾過障壁の機能異常が引き起こされているものと考えられた。