栄養飢餓に応答したタンパク質バルク分解を担う新奇オートファジー経路の解明

阐明一种新的自噬途径，负责响应营养饥饿而导致大量蛋白质降解

基本信息

批准号：
21K06243
负责人：
森安裕二
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Saitama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2023-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

1. 新奇オートファジーの性質を調べ、新奇オートファジーはオートファゴソームやオートリソソームが形成されなくても起こることを明らかにした。BY-2 細胞をマクロオートファジーを阻害する3-メチルアデニン(3-MA)を含むショ糖飢餓培地で培養し、マクロオートファジーやそれに伴うオートファゴソームやオートリソソームの形成をブロックした。 24 時間後、細胞から 3-MA を除去し、新奇オートファジーの検出を容易にするためにプロテアーゼ阻害剤 E-64c を添加したショ糖飢餓培地でさらに 24 時間培養した。結果は、マクロオートファジーやオートリソソームの形成が3-MAによってブロックされても、液胞内に未分解細胞質が蓄積することを示していた。この結果は、新奇オートファジーが、マクロオートファジーの起こる起こらないに関わらず、長時間のショ糖飢餓処理によって誘導されることを示している。2. 新奇オートファジーの性質を調べ、新奇オートファジーも3-MAで阻害されることを明らかにした。まず、ショ糖飢餓処理と同時に細胞を3-MAで処理すると、マクロオートファジーが阻害され、未分解細胞質をもつオートリソソームは蓄積しない(Takatsuka et al. 2004)。ここではさらに、3-MA存在下では、ショ糖飢餓処理24時間後にも未分解細胞質の液胞への蓄積が起こらないことを観察した。さらに、新奇オートファジーが始まるショ糖飢餓処理24 時間後に培地に3-MA を加えれば、未分解細胞質の液胞への蓄積は観察されなかった。これらのことは、マクロオートファジーだけでなく、新奇オートファジーも3-MAによって阻害されることを示している。

1。我们研究了新型自噬的特性，并揭示了新型自噬即使没有自噬体或自溶性的形成也会发生。将By-2细胞培养在含有3-甲基丹宁（3-MA）的蔗糖饥饿培养基中，该培养基（3-MA）抑制大型噬菌体，以阻断大小写，并相关的自噬体和自溶性的形成。 24小时后，将3-MA从细胞中取出，并在补充蛋白酶抑制剂E-64C的蔗糖饥饿培养基中再培养24小时，以促进发现新型自噬。结果表明，即使大藻噬菌体和自溶性形成被3-MA阻断，液泡内的不可核细胞质积累也是如此。该结果表明，无论大量噬菌是否发生，新型自噬是由长时间的蔗糖饥饿处理引起的。 2。我们研究了新型自噬的特性，并揭示了3-MA也抑制了新型自噬。首先，当细胞用3-MA同时用蔗糖饥饿处理时，抑制大型噬菌体，并且无核细胞质的自生物体不会积聚（Takatsuka etal。2004）。在这里，我们进一步观察到，在存在3-MA的情况下，即使在蔗糖饥饿24小时后，也不会发生在无法基因的细胞质液泡中。此外，当蔗糖饥饿处理后24小时将3-MA添加到培养基中时，未观察到未基因的细胞质液泡的积累。这些表明，不仅大量自噬，而且还被3-MA抑制了新型的自噬。