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膜タンパク質の膜貫通領域におけるタンパク質―タンパク質相互作用の検出

膜蛋白跨膜区域蛋白质-蛋白质相互作用的检测

基本信息

批准号：
14014238
负责人：
阿部義人
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究はタンパク質の疎水性の膜貫通領域の相互作用をどう評価するかを主眼として、系統的に膜タンパク質の機能、構造を見ていくことを目的とする。本研究期間での具体的な研究目的は膜タンパク質の相互作用の検出方法の構築であった。化学修飾試薬DTBPA(4,4'-Dithiobis(1-azidobenzene))は疎水的な性質を持つ膜内領域への化学修飾試薬であり、クロスリンカーでもある。これを使用し、膜内領域において近接しているタンパク質を検出する方法の開発を行った。当研究室では以前より赤血球膜の膜内ペプチドを検出できる系を確立してたが、質量分析計とHPLCとの併用により、さらに高感度にかつ定量的に赤血球膜タンパク質の膜内ドメインのトリプシン分解ペプチドを検出できる方法を開発した(投稿中)。また、有機溶媒による抽出法により、赤血球膜タンパク質の存在状態を簡便かつ迅速に検出する方法を開発した(投稿中)。DTBPAおよびその他のクロスリンカーによる修飾とこれらの方法を併用し、現在膜内ペプチドの近接部位の同定を続けている。さらにこれらの方法といくつかの化学修飾を組み合わせ、膜蛋白質band3の活性発現に重要な部位の検出を行った(投稿準備中)。これらの方法の開発は、現在当研究室で行っているband3蛋白質の構造解析を行ううえでも重要な知見となっている。様々な膜タンパク質についての構造と機能の解析は世界各地で精力的に行われている。しかし、これまで膜タンパク質は疎水性性質のため解析の手法が限られているのも事実である。今回のこの研究はこれら膜タンパク質の相互作用の解析方法に一石を投じるものとなると信じている。

This study is based on the evaluation of the interaction between the water-based film and the penetrating field of the film. The eye, the film, the quality, the function, the structure, the purpose of the system. During this study, the specific research purpose was to construct a method for the interaction of membrane materials and materials. The chemical modification test DTBPA (4,4'-Dithiobis(1-azidobenzene)) is a chemical modification test that maintains the properties of water in the membrane.これを use し, the membrane area においてapproaches しているタンパクquality を検出する method の开発を行った. When the laboratory established the intramembrane system of erythrocyte membranes and mass spectrometers and HPLC systems and used them together, the system was established Highly sensitive and quantitative erythrocyte membrane electrolyte intramembrane membrane membrane How to decompose ペプチドを検出できる using リプシンを开発した (under submission).また, organic solvent extraction method により, erythrocyte membrane タンパク性のexisting state を simple かつ rapid 検出する method を开発した (under submission). DTBPA およびそのhis のクロスリンカーによる Modification とこれらのThe method is to use a combination of the same method for the close parts of the membrane.さらにこれらのmethod and chemical modification を group み合わせ, membrane protein band3 active 発appears and important parts の検出を行った (preparing for submission).これらの法の开発は、Now I am working as a laboratory and I am working on the structural analysis of the band 3 protein.様々な片タンパク性についてのANALYSIS OF STRUCTURE AND FUNCTIONS に行われている of spirits from all over the world.しかし、これまで片タンパク性は疎 Water-based properties のためanalytic technique がlimit られているのも事実である. This time's research is based on the analysis method of the interaction between the membrane and the material, and the method of analyzing the interaction of the material with one stone.