膜タンパク質の膜貫通領域におけるタンパク質-タンパク質相互作用の検出

膜蛋白跨膜区域蛋白质-蛋白质相互作用的检测

• 批准号: 13206061
• 负责人: 阿部 義人
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13206061/
• 关键词: 膜タンパク質; タンパク質間相互作用; 化学修飾; バンド3タンパク質; 質量分析計

本研究はタンパク質の疎水性の膜貫通領域の相互作用をどう評価するかを主眼として、系統的に膜タンパク質の機能、構造を見ていくことを目的とする。本研究期間での具体的な研究目的は膜タンパク質の相互作用の検出方法の構築であった。化学修飾試薬DTBPA(4,4ユ-Dithiobis(1-azidobenzene))は疎水的な性質を持つ膜内領域への化学修飾試薬であり、クロスリンカーでもある。これを使用し、膜内領域において近接しているタンパク質を検出する方法の開発を行った。当研究室では以前より赤血球膜の膜内ペプチドを検出できる系を確立してたが、さらに高感度なMALDI-TOF MASSとHPLCとの併用により赤血球膜タンパク質であるバンド3タンパク質とグリコフォリンの膜内ドメインのすべてのトリプシン分解ペプチドを検出できる方法を開発した(投稿準備中)。また、有機溶媒による抽出法により、赤血球膜に存在するタンパク質およびペプチドを簡便かつ迅速に検出する方法を開発した(投稿準備中)。DTBPAおよびその他のクロスリンカーによる修飾とこれらの方法を併用し、現在膜内ペプチドの近接部位の同定を続けている。様々な膜タンパク質についての構造と機能の解析は世界各地で精力的に行われている。しかし、これまで膜タンパク質は疎水性性質のため解析の手法が限られているのも事実である。今回のこの研究はこれら膜タンパク質の相互作用の解析方法に一石を投じるものとなると信じている。

This study focuses on the evaluation of the interaction between the membrane and the water, and the function and structure of the membrane. The purpose of this study is to construct a method for detecting the interaction between membrane and substance. Chemical modification test DTBPA(4,4-Dithiobis(1-azidobenzene)) is a chemical modification test in the field of membrane. The development of the method of using the membrane in close proximity to the membrane is described. In the present study, we have developed a new method for the detection of erythrocyte membrane intracellular protein by using a combination of high sensitivity MALDI-TOF MASS and HPLC (submission preparation). The extraction method of organic solvent and the existence of red blood cell membrane have been developed to simplify and quickly detect the organic solvent (preparation for submission). DTBPA and other materials used in the film are modified and used in combination to determine the proximity of the film. The structure and function of the film are analyzed and the energy is distributed all over the world. It is true that there are limitations in the methods of analyzing the properties of membranes and water. This paper presents a new analytical method for the interaction between membrane and substance.

项目成果

N Hamasaki, Y Abe, M J. A. Tanner.: "Frexible Rrgions within the Membrane-Embedded Portions of Polytopic Membrane proteins"Biochemistry. (in press). (2002)

N Hamasaki，Y Abe，M J. A. Tanner.：“多位膜蛋白的膜嵌入部分内的柔性区域”生物化学。

Ohkuri T, Ueda T, Abe Y, Hamasaki N, Imoto T.: "Depression of aggregation in the folding process of reduced mutant lysozyme by ligand binding to its denatured structures"Biopolymers. (in press). (2002)

Ohkuri T、Ueda T、Abe Y、Hamasaki N、Imoto T.：“通过配体与其变性结构结合来抑制还原突变型溶菌酶折叠过程中的聚集”生物聚合物。

H Kuma, Y Abe, D Askin, L J.Bruce, T Hamasaki, M J.A.Tanner, N Hamasaki.: "Molecular Basis and Functional Consequences of the Dominant Effects of the Mutant Band 3 on the Structure of Normal Band 3 in Southeast Asian Ovalocytosis"Biochemistry. (in press).

H Kuma、Y Abe、D Askin、L J.Bruce、T Hamasaki、M J.A.Tanner、N Hamasaki.：“东南亚突变带 3 对正常带 3 结构的显着影响的分子基础和功能后果