新規リアルタイムDNA損傷修復応答検出システムの構築と腫瘍内DNA損傷応答の解析

新型实时DNA损伤修复反应检测系统的构建及瘤内DNA损伤反应分析

• 批准号: 21K07727
• 负责人: 小林 稔
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07727/
• 关键词: DNA損傷修復; In vivo imaging

前年度までに作成したDNA損傷を誘発する薬剤処理によってルシフェラーゼ活性が上昇する分割ルシフェラーゼ融合遺伝子を恒常的に発現する細胞を用いて、DNA損傷を誘発する薬剤に加えて放射線照射によるDNA損傷誘導時のルシフェラーゼ活性の変化を検討した。しかしながら、放射線照射時に、常温の照射装置内に一時的に細胞を置いた際の温度変化によって放射線照射の有無に関わらずルシフェラーゼの活性が大きく変動してしまったため、in vitroでの放射線依存的DNA損傷によるルシフェラーゼ活性変化を検出することが困難であった。そこで、放射線照射によるDNA損傷を確認するために温度恒常性が期待できるin vivoの移植腫瘍を用いた系で評価を行った。分割ルシフェラーゼ融合遺伝子を恒常的に発現する細胞をヌードマウスに移植し、腫瘍を作成した。作成した担がんマウスに対して放射線照射を行い、マウスに対して放射線照射後、様々なタイムポイントでルシフェリンを投与することで、腫瘍組織における放射線照射後の発光強度の変化を計測した。その結果、放射線照射後に一過的にルシフェラーゼの発光強度が増加し、その後減少するという、過去の知見と一致する結果が得られた。さらに、長期的な観察でも発光強度の変動が観察された。これらの結果から、作成した分割ルシフェラーゼ融合遺伝子がDNA損傷修復応答をin vivoでも観察できることが示唆された。

DNA damage before the annual ま で に made し た を 発 lure す る 薬 tonic 処 Richard に よ っ て ル シ フ ェ ラ ー ゼ active が rise す る segmentation ル シ フ ェ ラ ー ゼ fusion heritage 伝 son を constant に 発 now す る cells を using い を て, DNA damage induced 発 す る 薬 tonic に plus え て radiation に よ る DNA damage induced の ル シ フ ェ ラ ー ゼ active の variations change を 検 please Youdaoplaceholder0 た. し か し な が ら, when radiation に, normal temperature の irradiation device を に a temporary に cells within the set い た interstate の temperature variations change に よ っ て radiation の presence of に masato わ ら ず ル シ フ ェ ラ ー ゼ の active が big き く - move し て し ま っ た た め, in vitroで radiation-dependent DNA damage による シフェラ シフェラ ゼ ゼ activity changes を検 out of する とが とが difficult であった であった そ こ で, radiation に よ る DNA damage を confirm す る た め に temperature constancy が expect で き る in vivo の transplantation swollen sores を with い で た department review 価 を line っ た. Fusion segmentation ル シ フ ェ ラ ー ゼ heritage 伝 son を constant に 発 now す る cells を ヌ ー ド マ ウ ス し に transplantation and swollen sores を made し た. Make し た bear が ん マ ウ ス に し seaborne て radiation を い, マ ウ ス に し seaborne て after radiation exposure, others 々 な タ イ ム ポ イ ン ト で ル シ フ ェ リ ン を cast with す る こ と で, swollen sores に お け る after radiation の 発 light intensity の variations change を measuring し た. そ の results, after radiation に a に ル シ フ ェ ラ ー ゼ の 発 light intensity が raised し, そ の after reducing す る と い う, past の knowledge と consistent す る results ら が れ た. Youdaoplaceholder0, long-term な観 to observe で <s:1> the variation of the luminous intensity が観 to observe された. こ れ ら の results か ら, consummate し た segmentation ル シ フ ェ ラ ー ゼ fusion heritage 伝 son が DNA damage repair 応 answer を in vivo で も 観 examine で き る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Decreased expression levels of a histone acetyl reader, ATAD2, induces chemoresistance of cancer cells under severe hypoxia by inhibiting cell cycle progression in S phase

组蛋白乙酰读取器 ATAD2 表达水平降低，通过抑制 S 期细胞周期进程，在严重缺氧下诱导癌细胞产生化疗耐药性

• 发表时间: 2022
• 作者: 灰谷 崇夫;小林 稔;原田 浩
• 通讯作者: 原田 浩

がん微小環境に１細胞レベルで挑む

在单细胞水平上应对癌症微环境

• 发表时间: 2021
• 作者: Kunihiro Y;Tanaka N;Kawano R;Yujiri T;Ueda K;Gondo T;Kobayashi T;Matsumoto T;Ito K.;藤田 直也
• 通讯作者: 藤田 直也

Proteolysis of a histone acetyl reader, ATAD2, induces chemoresistance of cancer cells under severe hypoxia by inhibiting cell cycle progression in S phase

• DOI: 10.1016/j.canlet.2021.12.028
• 发表时间: 2022-01-03
• 期刊: CANCER LETTERS
• 影响因子: 9.7
• 作者: Haitani, Takao;Kobayashi, Minoru;Harada, Hiroshi
• 通讯作者: Harada, Hiroshi

Tumor microenvironment and radioresistance.

• DOI: 10.1038/s12276-021-00640-9
• 发表时间: 2021-06
• 期刊: Experimental & molecular medicine
• 影响因子: 12.8
• 作者: Suwa T;Kobayashi M;Nam JM;Harada H
• 通讯作者: Harada H

SPINK1 as a plasma marker for tumor hypoxia and a therapeutic target for radiosensitization.

• DOI: 10.1172/jci.insight.148135
• 发表时间: 2021-11-08
• 期刊: JCI insight
• 影响因子: 8
• 作者: Suwa T;Kobayashi M;Shirai Y;Nam JM;Tabuchi Y;Takeda N;Akamatsu S;Ogawa O;Mizowaki T;Hammond EM;Harada H
• 通讯作者: Harada H