Mechanism on epigenetic carcinogenesis of EB virus-gastric cancer focused on senescence

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胃癌のサブグループであるEpstein-Barrウイルス陽性胃癌（EBV胃癌）は、EBウイルスへの感染と、それに続くDNAメチル化によって癌抑制遺伝子が不活性化され発癌に至る。しかし、上皮細胞へのウイルス感染から発癌至るエピゲノム制御は明らかではない。本研究ではEBV胃癌発癌の分子メカニズムを明らかにすることを目的としている。今年度は、EBウイルス感染時の宿主細胞の不均一性について解析を行った。まず、前年度までに樹立していたDNAバーコード発現型GES1細胞を用いて、EBウイルス感染実験を行った。EBウイルス感染後の細胞からDNAバーコード配列を増幅し、シークエンシングした結果、初期細胞集団に含まれる約850種類のバーコードのうち、5種類のバーコードが再現良く濃縮していた。一方、レンチウイルスを用いた対照実験において濃縮していたバーコード配列は、非感染細胞で濃縮していたバーコード配列が多く含まれていた。以上より、レンチウイルスが確率論的に細胞に感染するのに対し、EBウイルスが細胞に感染し、細胞内で維持される上ではクローン間の不均一性があると考えられ、EBウイルス感染における「エリート細胞」の存在が示唆された。今後、EBウイルス感染前後の細胞集団を用いた、シングルセルRNAseq解析を行う。本研究で用いるDNAバーコードはmRNAに転写されるため、任意の細胞の遺伝子発現プロファイルがどのクローンに由来するかを明らかにすることができる。従って、「エリート細胞」における遺伝子発現プロファイル、あるいはクローンごとのEBウイルス感染に伴う遺伝子発現変動が明らかにできると考えられる。