微小変化型ネフローゼ症候群の発症にノンコーディング RNAは関与するか？

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昨年度までに、健常ヒトポドサイト細胞株におけるnc886遺伝子領域のDNAメチル化率の解析と、健常ヒトポドサイト細胞株における感染モデルとNSモデルでの nc886の発現解析を行った。今年度は、nc886が蛋白尿発現するポドサイト機能にどのように関与しているか検討するために、Poly(I:C)を用いた感染モデル、患者検体を用いたNSモデル、nc886ノックダウンポドサイトにおいて、蛋白尿発現時のポドサイト形態の特徴を示すかについての検討を開始した。感染モデルにおいて、ファロイジンの蛍光染色を用い、アクチンストレスファイバーの変化を検討したところ、Poly(I:C)刺激1時間後に、アクチン重合の減少を認めた。次に、nc886ノックダウンポドサイトにおいて同様の検討を行うために、siRNAを用いてnc886ノックダウンポドサイト細胞株の作成を試みた。siRNA導入後にRt-PCR法を用いてnc886発現を確認したが、未分化増殖期のポドサイト細胞株では有意なnc886の発現低下が得られなかった。そこで、HEK293T細胞におけるnc886ノックダウンを試みたところ、nc886発現低下を得られた。また、nc886が機能的にノックダウンされているか確認するために、nc886発限低下によりPKR活性が進むことから、Western blotting法を用いて、PKR活性を測定した。siRNAを導入したHEK293T細胞では、negative controlと比較してPKRが活性化していた。現在、再現性があるか検討中である。