角化におけるDNA分解機序の解明と創薬への展開

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1．proFLG-ABT誘導DNA分解におけるDNase1L2、DNase２、TREX2、CADの作用の解析proFLG-ABT誘導DNA分解における各DNaseの関与を検討するため、DNase1L2、DNase２、TREX2、CADに対するsiRNAを用いて培養表皮角化細胞(NHKs)に導入し各mRNAが有意に抑制されることを確認した。さらに各酵素の抑制の細胞増殖への影響を検討した。DNase1L2、DNase2の発現を抑制したNHKsは対照と比較しやや増殖が抑制されていたが有意な差ではなかった。これらの酵素を発現を抑制したNHKsにproFLG-ABTを導入し細胞死(DNA分解)に差が生じるか検討したが、いずれの酵素を抑制してもproFLG-ABTによる細胞死は抑制されなかった。以上よりproFLG-ABTによる細胞死はDNase1L2、DNase２、TREX2、CADの作用と関連は低い可能性が示唆された。２．proFLG-ABTと核内で結合する分子の角化への関与の検討昨年度より継続してproFLG-ABTと核内で結合する蛋白質、ERH、eIF6、SOCS7のNHKsにおける作用を解析している。まず、約分子の発現をsiRNAで抑制したNHKsの増殖について繰り返し検討したところ、ERH、eIF6の抑制によりNHKsの増殖は有意に抑制されたが、SOCS7の抑制では対照と概ね差がなかった。これらの分子と細胞増殖との関連を検討するため、皮膚有極細胞癌（SCC)と基底細胞癌（BCC)の組織を用いて免疫染色を施行し、ERH、eIF6は正常表皮と比較しSCCおよびBCCの核でより強く染色されることを確認した。現在ERH、eIF6の抑制がMAPK signal pathway、PI3K/AKT signal pathwayにどのように影響しているか解析中である。